血管性痴呆大鼠脑内超微结构变化及生长抑素和nNOS的表达.docVIP

　　血管性痴呆大鼠脑内超微结构变化及生长抑素和nNOS的表达 作者：宋志宇 卢宏 孙玉华 魏建科 谭岩 方艳秋 【摘要】 目的 研究血管性痴呆(VD)大鼠生长抑素(SS)、一氧化氮合酶(nNOS)的变化，探讨两者与认知功能的关系。方法 将30只14～15 atostatin (SS), nitric oxide synthase (nNOS) of thevascular dementia (VD) rats, and to explore the relationship bet and the cognitive function. Methods 30 14～15monthold rats ly divided into sham operation (SOG) and model groups (MDG), MDG group al model of the chronic front cerebral ischemia. SOG group ain carotid artery, but aze test emory of the rats. The transmission electron microscope munohistochemical method pus and temporal cortex. Results In the aze test, the escape latency of the MDG rats 〔(69.70±4.77)s〕 ber of crossplatform of MDG rats (1.80±1.31) a in hippocampal neurons, karyopyknosis or collapse, and mitochondrial smunohistochemistry results shopus poral lobe pus poral lobe emory of VD rats entia;orris水迷宫)〔3〕 分为定位航行实验及空间搜索实验两部分。定位航行实验：实验历时5 d，第1天让大鼠自由游泳2 min;从第2天起，每天分上、下午两段，每段训练4次，每次训练间隔为60 s。训练时随机选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中，记录大鼠寻找并爬上平台时所需时间(即潜伏期)。如果大鼠在120 s内未找到平台，须将其引至平台，这时潜伏期计为120 s。空间搜索实验：在第5天最后一次训练后撤除水下平台，在同一入水点将大鼠面向池壁放入水中，测其在120 s内跨过原平台相应位置的次数。术后61 d按上述方法进行学习记忆测试，按痴呆标准以假手术组大鼠逃避潜伏期的平均值作为 参考 值， 计算 VD大鼠逃避潜伏期的平均值与参考值之差占该鼠逃避潜伏期的比值，若该值大于20%为痴呆鼠。 　　1.3 电镜标本的制备 大鼠断头处死后，参照大鼠脑图谱，迅速切取右侧海马区组织块，迅速放入4℃预冷的4%戊二醛中固定，常规脱水、Epon812环氧树脂包埋，LKB超薄切片,醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色，应用日立H7500型透射电镜观察。 　　1.4 免疫组化试剂及方法 SS兔抗大鼠多克隆抗体、神经元型NOS (nNOS)兔抗大鼠多克隆抗体、免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)试剂盒(均购自武汉博士德生物工程有限公司)，采用SP免疫组化技术，实验步骤按试剂盒说明进行操作。将石蜡包埋组织连续4 μm切片，常规二甲苯脱腊，梯度酒精水化，进行微波抗原修复，PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。在海马CA1区及颞叶皮层，分区选择3个相邻视野，在400倍光镜下作免疫反应阳性神经元计数，结果取3个视野的平均值。 　　1.5 统计学处理 实验数据以x±s表示，组间比较采用t检验，所有数据采用运用SPSS11.5医学统计学软件处理。 　 　2 结 果 　　2.1 行为学测试 应用水迷宫实验，对两组大鼠学习记忆成绩进行比较，结果表明MDG组大鼠的逃避潜伏期较SOG组明显延长(Plt;0.05)，MDG组大鼠的跨平台次数较SOG组明显减少(Plt;0.05)，见表1，说明VD大鼠学习记忆能力降低。表1 水迷宫试验中小鼠的学习和记忆成绩与SOG组比较：1)Plt;0.05，下表同 　　2.2 透射电镜观察 SOG组可见神经元核膜完整，细胞器结构正常，线粒体结构清晰，可见溶酶体、粗面内质网。MDG组可见神经细胞高度水肿，细胞核变性，核固缩或崩解;线粒体肿胀，嵴的双层膜结构不清、断裂、萎缩，重者线粒体高度空泡化，正常线粒体少见;粗面内质网严重脱颗粒。见图1。 　　2.3 海马区及颞叶皮层区SS、nNOS阳性细胞表达情况 免疫组化结果表明，与SOG组比较MD