轻度认知功能障碍大鼠模型的制备及学习记忆能力的改变.docVIP

　　轻度认知功能障碍大鼠模型的制备及学习记忆能力的改变 【摘要】 　目的 建立轻度认知功能障碍(MCI)大鼠模型，并观察轻度认知功能障碍大鼠学习记忆能力的变化。方法 选取CI模型组、针刺百会组、针刺非经穴组,每组12只。采用周振华等研制的重度颈动脉狭窄所致认知功能障碍的大鼠模型并加以改进,造模后并采用电针 治疗 ,应用Morris水迷宫观察造模前后及治疗后大鼠认知功能的变化。结果 造模后与正常对照组比较，MCI模型组、针刺百会组及针刺非经穴组大鼠其潜伏期明显延长，呈显著性差异(Plt;0.05),穿越平台的次数减少(Plt;0.05),提示结扎双侧颈动脉可对大鼠学习记忆能力造成了影响。结论 结扎双侧颈动脉可导致轻度认知功能障碍，对大鼠的学习记忆能力造成了影响。 【关键词】 轻度认知功能障碍；颈总动脉;结扎；大鼠；学习记忆能力 　轻度认知功能障碍(MCI)是介于正常老化和痴呆之间的一种临床状态,与老年痴呆(AD)有相似的病理生理过程，现在大多沿袭AD的造模过程。 中国 防治认知功能障碍的专家组［14］已达成共识，认为血管性病变是MCI发病的非常重要的原因。因此本实验的造模方法是在参照周振华等［5］的重度颈动脉狭窄动物模型制作方法的基础上通过结扎大鼠双侧颈动脉制备了MCI大鼠模型,并用Morris水迷宫测试法对CI模型组、针刺百会组、针刺非经穴组、正常组每组12只。动物用标准食水饲养，自由摄取。 　　1.2 仪器与药品 自制鼠台、手术刀、手术剪、弯勾、眼科镊子、脱脂棉、持针器、缝合针、缝合线、注射器、“30号1寸华佗牌”毫针、 Hans电针仪、MT200 morris水迷宫跟踪分析系统(S1000)。10%水合氯醛、75%乙醇、碘伏、注射用青霉素。 　　1.3 造模方法 大鼠于术前8～12 h禁食，期间可自由饮水，用10%水合氯醛(3 mL/kg体重,腹腔注射)将其麻醉后，仰卧位固定于手术台上，随后将颈部皮肤剪毛备皮并用活力碘消毒，行颈侧向切口，仔细分离皮肤和肌肉，显露并游离双侧颈总动脉，在颈总动脉近心侧距颈内动脉(ICA)和颈外动脉(ECA)分叉处约1.5 cm处用0号手术缝合线将颈总动脉和直径0.45 mm的注射器针头一并仔细扎紧丝线打成活结，然后小心拔出针头，缝合伤口，造成脑持续性低灌注。术后每日肌注青霉素1.6万u,连续 3d，抗感染。 　　1.4 针刺 选取百会穴(顶骨正中)、大鼠头部两侧固定的非穴位点(百会穴与耳根联线的中点)。方法：两穴均向前沿皮刺入5 mm,不进行手法刺激，连接Hans电针仪，施以连续波，频率20 Hz，电压2～4 V，强度以大鼠安静耐受为度(约为2 mA)，留针20 min，隔日1次，4周为1个疗程。 　　1.5 大鼠Morris水迷宫实验 在造模前后及针刺前后分别进行水迷宫实验，参照Morris［6］方法进行。 　　1.5.1 水迷宫的组成 水迷宫由圆形水池、平台、摄像头及电脑组成。水池直径120 cm，高50 cm，池内水深30 cm，圆形水面被通过圆心的两条假想垂线划分为4个象限，将直径10 cm、高28 cm的平台置于任意一个象限中央。 　　1.5.2 行为检测过程 实验前将牛奶与水混合,用加热器将水温加热至22～26℃。将大鼠绑一红布，以便摄像头追踪其运动轨迹。将大鼠从一固定位置放入池内，时间设为70 s，用摄像头跟踪其运动轨迹，用电脑记录其运动轨迹。如经70 s未找到平台者，将其引领至平台，放置30 s后，再次从固定位置放入池内重新设定记录其运动轨迹。第1、2、3 d为训练期,不记录成绩。 　　1.5.3 定位航行实验(place navigation) 定位航行实验用来检测大鼠获取经验(学习)的能力。造模前后及针刺治疗后各组大鼠均接受此实验检测。方法：每次实验大鼠将从同一个固定位置放入水池，其入水后尽力逃避水患，当发现平台后则栖身其上，每次的训练时间设定为70 s，作为最大潜伏期，即逃避到平台上的潜伏期(escaping latency)。如果小鼠在70 s内未找到平台，其潜伏期按70 s 计算 ，记录各大鼠寻找平台的时间。时间越短表明大鼠的学习记忆能力越好。 　　 2 结果 　　2.1 一般情况 结扎双侧颈总动脉后，大多数大鼠眼睑下垂，活动能力低下，自发运动减少。MCI模型组死亡2只(1只麻醉过量，1只在造模时分离颈动脉过程中死亡)，针刺非经穴组死亡1只(造模后因呼吸困难死亡)。死亡大鼠实验数据不做统计。 　　2.2 对大鼠学习记忆的影响 见表1。 　　表1 各组大鼠逃避潜伏期比较（略） 　　注：与本组造模前潜伏期比较，#Plt;0.05；与正常对照组造模后、 治疗 后潜伏期比较，△Plt;0.05 　　由表1显示，造模前，各组大鼠逃避潜伏期无显著性