药用真菌杨树菇钙调素基因及活性初步鉴定.docVIP

Medical Diagnosis 医学诊断, 2012, 2, 7-11 /10.12677/md.2012.22002 Published Online June 2012 (/journal/md) The Molecular Cloning and Bioactivity Characterization of Calmodulin from Medicinal Fungus Agrocybe aegerita Yi Liang , Hui Sun 1 2 1 2 Department of Clinical Immunology, Guangdong Medical College, Dongguan The College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan Email: liangyi@ Received: Mar. 29th, 2012; revised: Apr. 9th, 2012; accepted: Apr. 24th, 2012 Abstract: Objective: The antitumor-associated gene of Agrocybe aegerita was cloned to identify the bioactivity. Method: cDNA library was constructed and the gene calmodulin was obtained by random sequencing. The eukaryotic expression vector was constructed to detect cell apoptosis and senescence activity. Result: The calmodulin gene was cloned with 588 bps code for 150 amino acid residues, and the amino acid sequence was very conserved in calmodulin family. The expression of cloned gene in HeLa cells did not induce the cell apoptosis or senescence. Conclusion: The sequence of calmodulin contained conserved motif and belonged to calmodulin family. Keywords: Medicinal Fungus; CaM; cDNA Sequence 药用真菌杨树菇钙调素基因及活性初步鉴定 1 一，孙慧 2 梁 1 2 广东医学院检验学院，临床免疫教研室，东莞 武汉大学生命科学学院，武汉 Email: liangyi@ 收稿日期：2012年 3月 29日；修回日期：2012年 4月 9日；录用日期：2012年 4月 24日 摘 要：目的：克隆杨树菇抗肿瘤相关蛋白基因，初步鉴定其活性。方法：构建 cDNA文库，随机测序得到杨 树菇钙调素(calmodulin，CaM)基因，并对其进行生物信息学分析，通过检测其在 HeLa 细胞中表达引起的细胞 凋亡及衰老的变化，初步鉴定其抗肿瘤活性。结果：得到全长为 588 bp的杨树菇钙调素 cDNA序列，编码 150 个氨基酸，其氨基酸序列在整个钙调素家族中十分保守。钙调素基因在真核细胞中表达没有引起肿瘤细胞的凋 亡和衰老。结论：杨树菇钙调素序列具有 CaM保守序列模式，是 CaM家族的成员。 关键词：药用真菌；CaM；cDNA序列 1.引言 [7] 另一类重要的抗肿瘤活性组分 。 然而由于药用真菌基因组信息缺乏，不易克隆蛋 药用真菌因其独特的药理活性被越来越多的研 白基因序列，药用真菌的抗肿瘤活性蛋白研究十分不 足。目前随着高通量测序技术的成熟，国内外学者也 都致力于对药用真菌基因组的测序工作，极大地推动 了药用真菌活性蛋白的研究。在之前的研究中，杨树 菇 Agrocybe aegerita活性蛋白在体内和体外试验中均 究者关注[1-3]。其中蛋白质组分占子实体干重约 10%~ ，但长期以来，仅有上百种蛋白/多肽被分离， 40% [4] 且多集中在对其氨基酸组成、活性分析等初步研究。 已有十多种药用真菌蛋白被报道具很强的抗肿瘤活 性(nM 级)[5,6] ，提示除多糖外，蛋白质是药用真菌中 Co