核医学 放射性标记.pptVIP

* 氚标记化合物合成（3H） 1.3H介绍：β，18.6KeV。。。。 2.氚的优点：来源丰富、弱-β、ARG分辨率高，可观察亚细胞形态，标记简单，得率高、比活度高、T1/2长、易运输、贮存安全。 3H同位素交换法：直接将3H气体引入待标记物，是不定位标记。 * 优点：简单、方便。 缺点：易标记在不稳定位置上、化学键易断、反应时间较长、比活度低、纯化困难。 3H气曝射交换：将化合物涂于管底，然后抽真空、通入氚气，密封反应。如秋水仙碱、喜树碱的3H标记。 * 该标记方法目前 有三项改进： ①微波活化氚气； ②扩大样品反应截面； ③加入催化剂，提高比活度。 * 催化交换法标记：将氚化溶液加入催化剂与待标记物进行反应。 氚标化学合成法：适合于含前体的化合物，先用氧化剂使之脱氢制成不饱各前体。然后操作如下：前体（如烯烃、炔烃等）+ 氚气—氚标化合物 催化卤素置换法：氚易在催化条件下与溴、碘原子发生置换反应。 氚化金属还原法：定位标记。 氚标生物化成法：将氚标化合物经酶促作用，转化为另外一种氚标记化合物。 * 四、一般实验室常用核素标记 （一）放射性碘标记物的一些概念 1、125I的特性： ①半衰期适中，商品化，易贮存，处理容易。 ②类似低能γ射线，易测量，辐射自分解小，标记物稳定性好。 2、 125I蛋白质、多肽的放射性碘标技术：标记部位在络氨酸残基苯环上的氢（氢被碘替代）。 * 影响因素 ①蛋白质分子中络胺酸残基的数量及他们分子中暴露程度。 ②碘化物的用量，反应条件（PH、温度、反应时间）、氧化剂的性质。 （二）碘标记方法及分类： 1、氯胺-T法： CH-T叫N-氯代对甲苯磺酰胺钠盐，为温和氧化剂。它在水中产生次氯酸，次氯酸可使碘离子变为碘分子125I2, 125I2可心置换酪氨酸残基苯环上的H，而加入偏重亚硫酸钠可中止氧化反应。 标记原理 * * 5微克人生长激素+74MBqNa125I+100微克CH-T反应一分钟，200微克Na2S2O5 终止反应，然后分离纯化即可。 * 本法优点： 效率高，重复性好，试剂价格低易得，是常用碘标法。（注意标记物是混合物） 分离方法：透析或凝胶过滤。 * CH-T标记实验应注意的问题 ①氯胺-T临时配制； ②氯胺-T用量要适宜，过大免疫活性和生物活性低，反之，标记率低； ③加入氯胺-T后尽快混匀； ④反应时间：0-24℃，1分钟左右； ⑤反应终止：偏重亚硫酸钠，约1.5倍CH-T量； ⑥反应体积小，使微量蛋白质保持高浓度，保证碘化效应。 ⑦PH值，根据不同的蛋白决定（7.3-7.8）。 * 2、乳过氧化物酶法： 乳过氧化物酶有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用生成125I2，并标记在蛋白质酪氨酸分子上。本法应该注意：反应条件温和，H2O2只需要极低浓度（1×10-3 mM）因而通常能保持标记化合物原有的生物活性和免疫活性。 缺点：标记率低，20-40% * 3、联接标记法： 先用Na125I和氧化剂（CH-T）碘化 酰化剂3-(对-羟基苯)丙酸-N琥珀亚胺酯（Bolton-Hunter试剂或BH） 再与蛋白质分子中的游离氨基酸相结合引入蛋白质中。 * 优点： ①避免蛋白质与氧化剂的接触； ②避免蛋白质与放射性碘的直接接触； ③防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤； ④适用于标记缺乏酪氨酸的蛋白质或酪氨酸在活性中心，引入碘原子后会引起蛋白质的失活。 缺点：操作麻烦，二步反应，引入异物，放射性碘利用率受一定影响。 * 4、固相氧化法（ Iodogen） Iodogen 在一定PH及温度范围内使用，在水中溶解度极小。 将Iodogen的二氯甲烷溶液放入反应管中或涂在小破片上，微微加热，使溶剂挥发后，反应管下部或小玻片上就形成Iodogen薄膜，蛋白质碘标记反应就在反应管中进行，或将小波片“悬挂”入加有Na125I的细胞培养液中，可使细胞表面的蛋白碘化。 优点：碘化效率高，对标记物的损伤程度小。 5、核酸碘标记： 即探针，原理同上。 举例：DNA的125I标记技术。操作程序 ①DNA常规提取纯化； ②DNA加热（70℃），分为单股DNA； ③用TLCL3将Na125I氧化产生125I2 ④调PH4.7，125I将取代嘧啶环上第5位的碳原子，形成共价结合的DNA单链。 ⑤降温，恢复双股DNA得125I-DNA； ⑥纯化。 * * 6、32P、35P、33P的标记： 这三核素主要用于标记核苷酸，而标记蛋白常用125I、3H。 * 五、放射性标记化合物的