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改良明胶酶谱测定明胶酶活性.pdf

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改良明胶酶谱测定明胶酶活性

·282 ·   2003 3 28 3 Med J Chin PLA Vol 28 No 3 Mar 2003  ·  · ① 710032   骞爱荣 商 澎 陈志南② 2cm , (1~2h);③  ;;; , 2.5% Triton X-100 , 2  R965.2 (45min/), , 37℃ 12~ 16h。④   (MMPs) 4h;1~2h, , 。、、 , 。 (MT-MMP)5。MMPs 1.6   [1] 28 。MMP 72k 92k , MMP-2MMP-9。 , 、、 。 、, A B(MMP-2, 9) 、, ;。 [2] 。 2    , (gelatin zymog- raphy), , - 2.1    1 S S。, 、。, 、。 100μl , MMPs , , 。, , MMP-2。 , 、、。MMPs 。 , , 。 1   1.1  ( Bio-Rad ), (), 96 (Nunc ), , CO (Heraeus ), , 2 。,Triton X-100()。 1.2   1.2mm, 13.3mm, 5 。 1  1.3   1%;2×(5%S S, 2% 2.2  2 , , 0.2%, 50mmol/L Tris-HCl, pH 6.8); 。MMPs 5、10、15h 25mmol/L Tris, 250mmol/L ,pH 8.3, 0.1%S S; 。1、3、5 , 2、4、6 :①30%;②1.0mol/L Tris-HCl 。 (pH6.8);③1.5mol/L Tris-HCl (pH8.8);④10%S S;⑤10% , , 。 ;⑥10%TEME ;2.5% Triton X-100 ; 50mmol/L Tris, 10mmol/L CaCl, 200mmol/L NaCl, 1μmol/L ZnCl 2 2 (pH 7.5);0.1% R-250;∶∶ =45∶45∶10. 1.4   ①(Fb)(HHCC) 5 , 0.25%, 10/96 , 24h;②, , PBS2, 300μl , 24h;③, (200g ),4℃。 2 (5、10、15h) 1.5   ①8% 5%, 0.1%, S S-。② 骞爱荣, 在读博士生。主要从事肿瘤细胞生物学和肿瘤药物学。已发 , (80~ 100μl), 1/2 表论文5 篇, 与申请专利2 项, 其中1项是国际PCT 专利。 , 150μl, , , 8V/cm ① ((863) (2001AA215061);② , 10V/cm,  2003 3 28 3 Med J Chin PLA Vol 28 No 3

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