血浆微量蛋白的测定及临床意义.pptVIP

血浆微量蛋白的测定及临床意义 一、血浆蛋白质测定方法的进展 比色法：如总蛋白的测定方法：双缩脲反应法；白蛋白的测定方法：溴甲酚绿法。 电泳法：是进一步分离蛋白质的方法。 免疫测定法：是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的分析方法。 二、免疫测定法的特点 特异性好：即某一抗原只与其相应的抗体起反应。 敏感性高：可检测出纳克（ng）水平的量 免疫测定法包括： 1、 免疫扩散法：敏感度在ug/ml，因此只能用于检测含量较高的蛋白质。且操作繁琐、时间长，需18-48小时。 2、 免疫电泳法：是区带电泳与免疫扩散相结合的方法。一般不能定量，仅用于检测异常蛋白成分。 3、 免疫浊度法：基本原理是：当可溶性抗原与相应抗体特异结合，在二者比例合适，并有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，即沉淀反应。 三、免疫浊度法的分类及原理 透射免疫比浊法 散射免疫比浊法。 透射免疫比浊法的原理 当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时，被形成的免疫复合物反射、遮挡或吸收而减弱。在一定范围内，吸光度（A）与IC量呈正相关。因此当抗体量固定时，根据吸光度可计算出抗原量。要求形成的IC达到一定的数量，而且分子颗粒较大，否则难以精确测定，因此检测灵敏度相对较低。 散射免疫比浊法的原理 光线通过检测溶液时，被反应形成的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，散射光强度（I）与样本的IC量、散射夹角（θ）成正比，而与入射光波长成反比。 散射免疫比浊法分为终点散射比浊法和速率散射免疫比浊法 终点散射免疫比浊法：当反应达到平衡时进行检测，通常需10-30min，且灵敏度较低 速率散射免疫比浊法：由于抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度在单位时间内时不同的，当反应开始时，进行动力学测定可以发现在某一时间反应速度最快，IC形成最多，散射光强度相应最大，即所谓速率峰（最大反应速率Vmax），Vmax与待测抗原量呈正相关而获得测定。 主要优点：快速、灵敏、精密度高、检测范围广 四、免疫比浊分析的影响因素 抗原抗体的比例：抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素。免疫比浊法的基本条件是在保持抗体过剩的情况下测定加入的抗原。但抗体过剩又必须适量。一般原则是先确定某一被测物的正常值，以±50%作为检测范围，抗体在此范围内应保持过剩。 抗体的质量：要求抗体有很强的特异性，有较高的效价，以及有高的亲和力。一般采用R型抗体。 反应溶液：一般采用PH在7.0左右的磷酸盐缓冲液。 增浊剂的作用：一般使用浓度为3%-4%的PEG6000 五、Array特定蛋白分析仪的简介 原理：采用速率散射比浊法 测定速度：40-80结果/小时，每次可检测40个标本。 特点：具有抗原过剩识别功能 抗原过剩识别 在抗体量一定的情况下，免疫复合物生成量随着抗原量的增加而增多，但抗原量超过一定域值后，免疫复合物的量却随之减少，影响检测的准确性。 Array360抗原过剩识别功能工作原理 在检测到抗原抗体反应速率峰之后，在反应溶液中加入能与过剩抗体反应的微量的Ag， 若反应溶液中有过剩抗体存在，则与加入的Ag反应，形成一个过剩抗体峰； 若反应溶液中无过剩抗体存在，不能检测到过剩抗体峰的存在。 当一个反应，有速率峰和过剩抗体峰同时存在时，仪器将确认第一次出现的速率峰有效，并将结果打印出来； 而没有过剩抗体峰存在的反应，仪器将重新对标本进行更高稀释度的稀释，然后再测定结果。 六、部分血浆微量蛋白质的临床意义 （一）、防卫蛋白 免疫球蛋白（Ig）：包括IgG、IgA、IgM IgA 临床意义：（1）低Ig血症：分先天性和获得性，获得性低Ig血症见于大量蛋白质流失的疾病，如肾病综合症、淋巴网状系统肿瘤等；（2）高Ig血症：见于感染，自身免疫病、肝脏疾病及M蛋白血症等、慢性活动性肝炎IgG和IgM升高明显。SLE以IgG、IgA或IgM升高较多见，类风湿性关节炎则以IgM增高为主。 正常参考值：IgG：6.94-16.18g/L IgA：0.6-2.63g/L IgA IgM：0.68-3.78g/L 补体：包括C3、C4 补体系统是人体抵抗感染甚至肿瘤的多种天然防御机制之一，定量检测各种补体成分有助于诊断免疫功能紊乱 临床意义：①补体升高：一般见于各种传染病、组织损伤、急性炎症及肿瘤患者；②补体降低：多见于自身免疫性疾病、SLE、慢性肝病、肾小球肾炎等。 参考值：C3 0.88-2.01g/L C4 0.16-0.47g/L κ和λ轻链（KAP和LAM） 用于诊断单克隆γ-球蛋白病，主要见于多发性骨髓瘤，除IgG、