第十一章 种质离.pptVIP

（3）材料的预备和预处理 材料的生长状态和年龄的选择 培养细胞处于旺盛的对数分裂期 液体悬浮培养细胞以5—7天 抗冻能力强， 固体培养的愈伤组织以9—12天为宜 存活率高野外生长的植物的芽（冬天低温锻炼） * 预培养：在冰冻保存前的预培养中加入提高抗寒力的物质如：梨糖醇、脱落酸等，或将培养基的糖浓度提高，这样可以提高存活率。 冰冻保护剂：由于一些冰冻保护剂的成分有毒性，冰冻保护剂预处理必须在0 ℃下进行处理时间不能太长，一般不超过1h。 * （4）超低温保存操作 ? 快速冷冻法 ? 慢速冷冻法 ? 分步冷冻法 ? 脱水干燥法 ? 化冻操作 再培养 ? 生活力和存活力的测定 荧光素双醋酸酯染色法FAD 氯化三苯四氮唑法 TTC * 快速冷冻法：适用于培养物细胞体能小，胞质浓、含水量低、液泡化程度低的材料。将植物材料从0℃或其他预处理温度直接投入液氮罐中，降温速度为1000℃/min以上。这种快速降温可使细胞内的水在迅速越过-140℃这一冰晶形成的危险温度期后，细胞内的水形成“玻璃化”状态，不会对细胞产生破坏作用。 * 慢速冷冻法：适用于含有大液泡的成熟