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大肠埃希菌耐药性质粒的提取及鉴定 作者：张帆，李菁华，史红艳，孙延波 【摘要】 目的 检测大肠埃希菌对9种抗生素的耐药性，探讨大肠埃希菌耐药的分子机制。 方法 采用平皿二倍稀释法测定40株临床分离的大肠埃希菌对抗生素的敏感性，同时用碱裂解法对耐药菌株进行质粒的抽提，将得到的质粒转化至受体菌JM109进行质粒耐药性的鉴定。结果 40株大肠埃希菌对头孢菌素等9种抗生素呈现出不同程度的耐药现象。对氨苄西林和青霉素的耐药性分别达到了87.5%和97.5%。从两株耐药大肠埃希菌中提取出质粒，对其中一株进行转化鉴定，确定为耐药质粒，大小约为3.0kb。结论 临床分离大肠埃希菌对多种抗生素表现出较高的耐药性，而耐药性质粒的存在是细菌产生耐药性的机制之一。 【关键词】 大肠埃希菌；耐药性；质粒 Extraction and identification of resistance plasmids in Escherichia coli 【Abstract】 Objective To detect the antibiotic susceptibility of E.coli strains to 9 antibacterial agents and to explore the molecular mechanism of resistance in E.coli.Methods Antibiotic susceptibility of 40 strains of E.coli isolates were carried out by the agar dilution method.Plasmid DNA were extracted by alkaline lysis and R plasmid was identified by transformation.Results 40 strains of E.coli isolates exhibit resistance to 9 different antibiotics in some extent. The resistant rates to ampicillin and penicillin were 87.5% and 97.5%,respectively.Two plasmids of 3.0kb were isolated from two strains of E.coli.Conclusion 40 strains of E.coli isolates exhibit resistance to 9 antibiotics and molecular mechanisms of resistance in some strains of E.coli were mediated by R plasmid in part. 【Key words】 Escherichia coli;drug resistance;plasmid 大肠埃希菌是引起呼吸道和泌尿生殖道感染的常见条件致病菌［1］。随着第三代头孢菌素的广泛 应用 ，此类细菌表现出较严重的多重耐药性，并常导致严重的院内感染，使得抗菌感染 治疗 变得棘手。近年来大量 文献 证实了产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是造成大肠埃希菌对第三代头孢菌素的耐药性重要原因［2］。质粒介导的耐药性是细菌产生耐药性的原因之一，携带多种耐药表型的R质粒常在某一地区流行并在一定条件下可在细菌中传播。因此，对耐药机制的 研究 是预防和控制细菌耐药的战略措施［3］。本研究对40株临床分离的大肠埃希菌进行了耐药性的测定，并对耐药菌株进行了质粒的提取及鉴定。 　　1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌株来源 40株大肠埃希菌由临床分离并进行鉴定。大肠杆菌JM109由本实验室保存。 1.1.2 药品和试剂 氨苄西林，青霉素（购自华北制药股份有限公司）；头孢拉定，头孢噻肟钠，头孢哌酮钠，头孢曲松钠（购自上海先锋药业有限公司）；红霉素（购自大连美罗大药厂）；阿奇霉素（购自杭州澳亚生物技术有限公司）；盐酸环丙沙星（购自贵州科伦药业有限公司）；酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）（购自BioFlux公司）；普通营养琼脂培养基（购自杭州天和微生物试剂有限公司）。质粒提取液：溶液Ⅰ：含50mmol/L的葡萄糖，25mmol/L Tris·C1（pH8.0），10mmol/L EDTA；溶液：含0.2mol/L NaOH和1%SDS（现用现配）；溶液：5mol/L KAc 60ml，HAc 11.5ml，水28.5ml配置成100ml的溶液。 1.2 方法 1.2.1 药敏试验 采用常规琼脂二倍稀释法检测40株大肠埃希菌对9种