应的初步研究.PDFVIP

临床与病理杂志 2015, 35(3) J Clin Path ol R e s 417 doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.018 View this article at: /10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.018 α 壳聚糖转运针对TNF siRNA的可行性及其对于炎症因子抑制效 应的初步研究 邹国辉 ，左新年 ，丁江华 ，戴祺 ，郑冰冰1 1 2 1 1 (解放军第一七一医院(九江学院附属一七一医院) 1. 消化内科，2. 肿瘤科，江西 九江 332000) [摘　要] 目的：初步探索壳聚糖 /siRNA纳米颗粒应用于炎症性肠病的可行性。方法：应用直接混合法将壳 聚糖溶液与siRNA按照N/P 比为60混合形成壳聚糖/siRNA纳米颗粒，采用Zetasizer粒度仪对纳米颗 粒直径进行检测，扫描电镜观察其形态以及透射电镜观察其结构；将纳米粒与RNA 酶孵育后采用 2%琼脂糖凝胶电泳分析其保护作用；采用细菌脂多糖 (lipopolysaccharides ，LPS) 对小鼠巨噬细胞 系R AW264.7进行炎症因子诱导后进行体外实验，荧光显微镜观察其转染效率，采用针对TNF α 的 siRNA进行转染，TaqMan荧光定量PCR 和ELISA 对TNF α 的表达进行定量分析；利用MTT 方法对转 染后的细胞进行活力测试。 结果：壳聚糖 /siRNA纳米粒形态较为均一，粒径在200 nm左右；壳聚 糖能够与siRNA形成可逆性结合，保护siRNA不被酶降解长达 120 min以上；该纳米粒能够高效率的 实现对巨噬细胞的转染；纳米粒转染后对LPS诱导巨噬细胞分泌大量的TNF α起到显著的抑制作用， 效率高达50% 以上，且细胞活性没有明显改变。结论：壳聚糖/siRNA纳米粒系统能够有效的转染巨 噬细胞，实现对炎症因子TNFα 的抑制作用，为炎症性肠病的分子治疗提供了一定的参考价值。 [关键词] 炎症性肠病；肿瘤坏死因子α ；壳聚糖；小干扰RNA ；基因沉默 A preliminary study of the possible utilization of chitosan/ siRNA in the inflammatory bowel disease 1 1 2 1 1 ZOU Guohui , ZUO Xinnian , DING Jianghua , DAI Qi , ZHENG Bingbing (1. Department of Gastroenterology, 2. Department of oncology, the 171st hospital of PLA, 171 Hospital, Jiujiang University, Jiujiang Jiangxi 332000, China) Abstract Objective: To explore the possible utilization of chitosan/siRNA in the inflammatory bowel disease. Methods: The chitosan molec