稀土荧光探针检测多巴胺及类似物_图文.pptVIP

稀土荧光探针检测多巴胺及类似物 答辩人：袁洁 导师：赵美萍 副教授 2003年6月18日 选题背景 已有检测方法综述 实验部分 总结 致谢 儿茶酚胺的结构 及生理意义 儿茶酚胺（catecholamine, CA）的种类、结构和生理意义 神经递质在单细胞检测中的意义 Dopamine（DA） 瑞典神经药理学家Carlsson于1958年首次提出脑内多巴胺(DA)是独立的神经递质 正常值范围为血浆：＜888pmol/L； 尿：424-2612nmo1/24h。 增高会引起嗜铬细胞瘤，心肌梗塞，糖尿病酮症酸中毒等一系列疾病。而其含量的降低会引起植物神经病变，帕金森病等。 Epinephrine（E） nor epinephrine （NE） 在人体内的正常值 范围为 血浆：＜480pmo1/L； 尿：0-80nmo1/24h 对儿茶酚胺的检测手段 稀土荧光探针检测儿茶酚类化合物的原理 单纯的TbCl3，Tb-DCTA体系和DOPAC在实验用的波长条件下(298nm,546.8nm)都没有荧光信号，可见体系发光是由于形成了Tb-DCTA－DOPAC三重络合物并发生了能量转移得结果。 1.三元络合物的形成 三元络合物体系： 1.离子缔合三元络合物 2.金属离子先后结合两种配体形成三元络合物 Tb－DCTA－CAs体系： Tb与DCTA先行络合，然后Tb余下的空位再与CAs络合，形成三重络合体系 2.三元络合物发光机理(1) 配体受激后,单重态（S1）有三种方式退激： a. 产生荧光的辐射跃迁(S1-S0) b. 系间窜跃(S1-T1) c. 无辐射跃迁回基态(ISC) 三重态（T 1）也有三种退激方式： a. 产生磷光的辐射跃迁(T1-S0) b. 通过无辐射转移跃迁到Tb3＋的激发态(ET)，c. 无辐射跃迁回基态(T1～S0)。 2.三元络合物发光机理(2) 分子内能量转换效率的影响因素： 1.配体最低的激发三重态（T1）能量高于Tb的5D4能级的能量 2.能量转移的速率大于三重态无辐射退激的速率 3.从配体激发单重态向三重态系间窜跃的速率和几率相当高 2.三元络合物发光机理(3) 儿茶酚胺的磷光发射波长在409 nm－417 nm，亦即其三重态（T1）的能量高于Tb3＋的5D 4能级约3800-4000 cm －1 高量子产率和跃迁几率 能量转移速率常数高达1010s－1 由水或解离的氧导致的配体三重态（T1）以及Tb3＋， 发光的猝灭也大大减少了。 实验条件的优化 稀土离子与第一配体的选择： 1. Eu3＋ + EDTA体系 ； 2. Eu3＋＋phen体系； 小结： 最终弃用这两个体系的原因，是其适用的pH范围太低，难以使DA的羟基充分解离形成三元络合物。 实验条件的优化 稀土离子与第一配体的选择： 3. Tb3＋ + EDTA体系（1）： Tb:EDTA＝1:1（浓度均为2 mmol/L）, pH＝11, λex＝300 nm，λem＝545 nm,加入甲醇（分析纯）、CsCl、TOPO等尝试敏化,无法得到满意 检测限，DA为10－5 mol/L 小结： 目前研究最多的体系，适用的pH相对于前两个体系有了很大提高，但是仍然未能达到文献报道的结果 实验条件的优化 稀土离子与第一配体的选择： 3. Tb3＋ + EDTA体系（2）： Tb:EDTA＝1:1（浓度均为2 mmol/L）, pH＝11, λex＝240 nm，λem＝545 nm,出现递减结果 小结： 在λex＝240 nm，λem＝545 nm,出现的Tb3＋特征波长处的递减结果，可能是由于在检测条件下,Tb－EDTA体系能发出Tb3＋的特征荧光，而待测物与之形成三重络合体系后,激发波长红移，亦即三重络合体系的形成导致了一部分Tb3＋特征荧光的猝灭。 实验条件的优化 稀土离子与第一配体的选择： 4. Tb3＋ + DCTA体系 ： 20oC 时， Tb3＋与EDTA的络合常数lgK1为17.93，而与DCTA的络合常数lgK1为20.20* 因此本体系可以在更高pH下存在，更利于三重络合物形成 pH影响 表面活性剂的影响 由于水分子对荧光有相当的猝灭作用，体系又是在水相中，因此尝试加入表面活性剂进行改进。期望荧光体系能够被包裹在表面活性剂形成的胶束中得到保护，起到敏化作用。 共尝试加入了