新型水溶性不对称五甲川吲哚菁染料的合成、荧光性能及荧光标记.pdfVIP

第 31卷 第 11期 应 用 化 学 Vo1．31Iss．11 2014年 11月 CHINESEJ0URNALOFAPPLIEDCHEMISTRY NOV．2014 新型水溶性不对称五 甲川吲哚菁染料的 合成、荧光性能及荧光标记 汤 昆。 邱 娜 吴 品 贾春辉 王 升 张付利 (。河南大学医学院环境医学研究所 开封 475004；河南大学药学院 开封 475004； 河南晋开化工投资控股集团有限责任公司二分公司 开封475100) 摘 要 合成了枝状聚乙二醇醚链取代的新型不对称五甲川吲哚菁荧光染料 ，利用 HNMR、HRMS等技术手 段表征了化合物的结构，并测定 了染料的荧光性能、光稳定性 ，标示 了牛血清 白蛋白。结果表明，该染料的最 大吸收波长为657am，最大荧光发射波长为671am，荧光量子产率为0．24，经过8h的光照反应，染料有 4．4％产生光降解，溶于水，n(染料)：n(牛血清白蛋白)=2：1时，标记蛋白质的染脊斗／蛋白质(D／P)值达 1．57。 关键词 吲哚菁染料，五甲川，荧光标记 ，枝状化合物 ，牛血清白蛋白，荧光量子产率 中图分类号：O621 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000-0518(2014)11．1255-06 D0I：10．3724／SP．J．1095．2014．30661 吲哚菁染料具有光谱范围广(550～1200nm)、高荧光量子产率、高光稳定性、高选择性和高灵敏度 等特性，是性能优 良的荧光标记染料，广泛应用于蛋白质 4。、核酸_5。。及其它生物分子的标记和检 测 。。尤其是五甲川菁染料在生物标记中可有效的避开生物 自荧光的干扰，提高信噪比；而单侧引入 羧基的不对称菁染料，更具有标记产物组成简单，有利于荧光分析检测和定量转化等优点。但不对称菁 染料的合成复杂，副反应多，副产物极性相近，产物的分离提纯困难，收率低。我们合成了一种水溶性不 对称吲哚菁染料，该染料在吲哚 “N’，上引入了一个非离子水溶性基团，使产物的分离提纯比较简单，用 自制C18反相硅胶填料分离柱即可得到高纯染料，染料的荧光量子产率、光稳定性、水溶性、标记蛋 白 质的标记率等均大幅提高，在生物标记领域有广泛的应用前景。 1 实验部分 1．1 试剂和仪器 4一磺酸基苯肼(分析纯，太仓华联化工实业有限公司)；3一甲基-2丁酮 (分析纯，上海萨恩化学技术 有限公司)；对甲苯磺酰氯 (分析纯，上海阿拉丁试剂)；三乙二醇单 甲醚 (分析纯，上海东京化成工业株 式会社)；罗丹明B(优级纯，上海梯希爱化成工业发展有限公司)；2．琥珀酰亚胺基一1，1，3，3一四甲基脲 四氟硼酸酯(分析纯，天津 AlfaAesar试剂)；三 乙胺 (分析纯，天津 AlfaAesar试剂)；牛血清 白蛋 白 (Biosharp)；C18反相柱填料(48～75 m，西安交大保赛生物技术股份有限公司)。 PE—Lambda35型双通道紫外一可见分光光度计(美 国珀金埃尔默仪器责任有限公司)；FluoroSENS型 稳态荧 光光 谱 仪 (英 国 Gilden公 司)；AVANCE．400MHz型 核磁共 振 仪 (瑞 士布 鲁克 公 司)； ESQUIREL·C／Agilentl100型液相色谱一质谱联用仪 (德国布鲁克公司／美国安捷伦公司)；MICROTOF—Q Ⅱ型电喷雾四级杆飞行时间质谱仪(德国BRUKER公司)。 1．2 实验方法 化合物的合成路线如 Scheme1所示。 2013-12-26收稿，2014-03—19修回，2014-04-29接受 国家自然科学基金资助项 目 通讯联系人：张付利，教授；Tel／Fax：0371E-mail：hdzfl508@163．com；研究方向：有机合成 1256 应 用 化 学 第31卷 03S