P21在肾小球系膜细胞的表达变化与意义.pdfVIP

P 在肾小球系膜细胞的表达变化及意义△ 21 柳飞，唐万欣，黄颂敏* 四川大学华西医院肾内科，四川 成都 610041 摘 要：目的：探讨高糖、胰岛素对肾小球系膜细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21表 达的影响及其在糖尿病肾病（DN）发病机制中的作用。方法：将培养的大鼠 1097 系膜细胞 株分为 8 组：正常对照组，高糖组，甘露醇组，不同浓度胰岛素组，高糖加不同浓度胰岛素 组。用RT-PCR法检测各组系膜细胞P21mRNA表达。流式细胞仪定量检测各组系膜细胞前向角度 散射光 （FSC）大小。结果：正常对照组系膜细胞中P mRNA有一定表达。高糖组P mRNA表达 21 21 明显增加为正常对照组的 3.89倍(p0.01)；FSC为正常对照组的 1.42 倍(p0.01)。不同浓 度胰岛素组 系膜细胞P21mRNA表达及FSC大小随胰岛素浓度增加而增加，但无统计学意义 （p0.05 ）。结论：(1) P21mRNA在正常肾小球系膜细胞有一定表达。(2) 高糖刺激可使系膜 细胞P mRNA表达上调，且与渗透压无明显关系。(3) P mRNA表达上调可导致系膜细胞肥大， 21 21 在糖尿病肾病发病机制中起重要作用。 关键词：糖尿病肾病 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P 细胞肥大 21 糖尿病肾病 （Diabetic Nephropathy, DN ）是糠尿病主要的微血管并发症之一。在西方发 达国家，DN 已成为终末期肾功衰（End-stage Renal Failure, ESRD ）的首位病因。在我国， 随着糖尿病的逐渐增加，糖尿病肾病也呈上升趋势。因此，深入研究 DN 的发病机制，制定 更加有效的防治措施已成为肾脏病工作者面临的重要问题。 DN 的发病机制尚未完全阐明，一般认为是多种因素共同作用的结果。DN早期即出现 肾小球高滤过以及肾小球肥大。肾小球肥大可导致肾脏结构不可逆的变化，如肾小球硬化和 肾小管间质纤维化，最终导致终末期肾功衰。近年来的研究证实各种因素对细胞生长的影响 最终发生在细胞周期水平[1] 。细胞周期调控依赖于一系列细胞周期调控蛋白。其中，P21是目 前已知的具最广泛活性的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂。P21 的过度表达与许多细胞增殖 抑制和肥大有关[2-4] 。有研究表明，糖尿病早期肾脏肥大至少部分与肾皮质P21蛋白表达增加 有关[5] 。而系膜细胞肥大在早期肾小球肥大中起关键作用，这已在糖尿病患者和糖尿病大鼠 动物模型研究中得到证实[6、7] 。P21在肾小球系膜细胞肥大中发挥什么作用，目前国内外研究 甚少。 本研究采用半定量RT-PCR法，观察高糖刺激，不同浓度胰岛素作用下，鼠 1097 系膜 细胞中P21mRNA 的表达及其变化。相应条件下，用流式细胞仪测量细胞前向角散射光大小， 从而获得系膜细胞体积大小，从细胞分子水平探讨高糖、胰岛素干预下，P21 在系膜细胞肥 大-肾小球肥大的关系，为DN 的防治寻求新的治疗靶。 1 材料和方法 *通讯作者 △教育部博士点基金资助项目，编号 20020610078 1 1.1 试剂： RPMI1640 培养基由美国 GIBCO 公司提供，小牛血清由成都哈里生物有限公司 提供，Trizol RNA 提取液和 Titan TM one tube RT-PCR 试剂盒由大连宝生物有限公司提供。 1.2 细胞来源及分组 大鼠 1097 系膜细胞株来源于中山医科大学附一院肾脏病临床研究重 点实验室。本实验所用细胞为 5-7 代。将系膜细胞分为 8 组：正常对照组，生理浓度胰岛素 -9