抗线虫基因表达载体构建和转化甘蔗研究初报-农业部磊.PDF

中 国生 态 农 业 学 报 vOI．12 NO．4 第 12卷 第 4期 2004年 10月 ChineseJournalofEco—Agriculture 0ct．． 2004 抗线虫基因表达载体构建与转化甘蔗研究初报 陈平华 许莉萍 陈如凯 c、农业部甘磊蔗生理生态与遗传改良重点实验室福…州”3…soo…o2， 摘 要 试验研究利用德 国引进 的抗线虫基 因 I-Is1pro一1构建表达载体并转化甘蔗 (Saccharumofficinarum L．)， 以获得抗线虫转基因植株。提取克隆载体P1832用 NcoI酶切 、Klenow补平和 SacI酶切 ，回收基 因片段；提取表 达载体pBIL-1用KpnI酶切 、T4DNApolymerase补平和 SacI酶切，回收大片段；目的片段用T4DNAligase连接 并转化E．coli，鉴定重组质粒；用基因枪轰击转化甘蔗品种 “ROC”16获得 16株再生苗，其中4株经PCR检测呈阳 性，通过 Southern杂交，证明Hs1pro一1基因已整合到其中3株甘蔗基因组中。 关键词 抗线虫基因 表达载体构建 基因枪轰击 甘蔗 Constructionofexpressionvectorofnematode—resistantgeneand transformationofsugarcane．CHEN Ping—Hua．XU Li—Ping，CHENRu—Kai(InstituteofSugarcane，FujianAgriculturalandForestryUniversity；KeyLabofEco—physiology andGeneticImprovementforSugarcane，MinistryofAgriculture，Fuzhou350002)，CJEA，2004，12(4)：57～59 Abstract TheexpressionvectorofH 1pro一1ofnematode-resistahtgenecloned by theGermany scientistswascon— structedandtransform ed intosugarcanetOgetthetransgenicplants．TheclonedvectorP1832wasdigestedwithrestric— tionnucleaseNcoI．DNA polymeraseILargeFragmentandSacI inorder．Theshortfragm entwaspurified．Expres— sionvectorpBIL-1wasdigestedwithKpnI，bluntedwithT4DNA polymeraseanddigested againwithSacI．The largefragmentwasisolated．Theshortfragm entofP1832wasligatedwiththelargefragmentofpBIL一1byT4DNA、li— gaseandthereactantwastransferredintoE ．coli．Therecombinantplasm idwasidentifiedandtransformedintosugarcane genotype“ROC”16 viaparticlebombardment．Sixteen kanamycin—resistantsugarcaneseed lingswereobtainedand four seedlingswerepositivebyPCR ，ofwhichthreewereprovedtObetransgenicplantsbysouthernblot． Keywords Nematoderesistancegene，Constructionofexpressionvector，Particlebombardment，Sugarcane 线虫(Heteroderaavenae)侵入或取食甘蔗幼嫩根尖，造成根尖畸形或侧根消失，使植株丧失吸