棉花VP基因家族鉴定及其表达分析.pdfVIP

Identification and expression analysis of VP gene family in cotton A Dissertation Submitted to The Graduate School of Henan University In Partial Fulfillment of the Requirements For the Degree of Master of Science By Zhao Xiaojie Supervisor: Prof. Ye Wuwei Prof. Song Chunpeng May ，2015 摘 要 棉花是最重要的纤维作物，也是盐碱地的先锋作物。开展棉花耐盐性研究，提 高棉花的耐盐性，充分利用我国盐碱地已成为重要的研究课题。焦磷酸酶 （pyrophosphatase ，PPase ）是以焦磷酸（pyrophosphate ，PPi ）为底物的水解酶， + + H -PPase （H -translocating inorganicpyrophosphatase ）是液泡膜上的一种重要质子泵， 在调控细胞膨胀、H+ 电化学梯度、无机离子、有机酸和糖类等次级主动运输过程中 发挥着重要作用。在低温、干旱、高浓度NaCl 和厌氧条件下，可以促使 VP 基因的 表达，维持细胞内部平衡，可以提高植物的抗逆能力。本研究对棉花基因组中 VP 基因家族成员进行了系统分析，利用雷蒙德氏棉、亚洲棉(石系亚1 号)和陆地棉( 中 9807、中s9612、中9409、GK50、Y2067 和GZ)为实验材料，对 VP 基因各家族成 员进行克隆，并根据盐胁迫（0.4% ）后各基因成员的表达量变化和转基因种子的耐 盐性萌发能力对VP 基因进行功能分析，主要研究结果如下： 1．比较系统的分析了棉花A 、D 基因组中的 VP 基因家族成员。利用棉属二倍体雷 蒙德氏棉（D 组）和亚洲棉（A 组）基因组信息，以GhVP(Gene Bank No. :ADN96173.1) 序列为参考序列，共鉴定出13 个 VP 基因成员，其中A 组6 个(GaVP1-GaVP6) ，D 组7 个(GrVP7-GrVP13) ，是一类在植物进化中相对比较保守的家族。 2 ．分析了VP 基因家族的进化关系。从进化树分析可知，同一物种内的VP 基因序 列相似性较高，亲缘关系也相对较近；基因结构分析结果显示，大部分 VP 基因的 外显子数量都为7-8 个，少数 VP 基因的外显子数量差异较大，1-14 个不等；对保 守结构域分析可知，VP 基因成员都具有多个相对保守的结构域，如肉豆蔻基化位 点，酪蛋白激酶位点Ⅱ，蛋白激酶磷酸化位点等，为进一步研究棉花中 VP 基因的 功能提供了重要依据。 3 ．研究了 VP 基因家族的表达水平。荧光定量结果表明，VP 基因成员在不同组织 中的表达水平不同，其中在叶片中表达水平最高，纤维中的表达水平最低，存在组 织特异性。而且随着盐胁迫强度的增加，VP 家族中不同成员的表达水平发生变化 不同。 I 4 ．克隆了棉花GhVP 基因。构建pBI121-Gh VP::GFP 荧光表达载体，采用基因枪技 术转化洋葱内表皮细胞，结果显示 GhVP 基因定位于细胞质膜上。构建 pBI121-Gh VP::GFP 荧光表达载体转化棉花花粉，花粉荧光明显增强，说明 pBI121-Gh VP::GFP 基因可以在棉花中表达，为GhVP 基因在棉花中表达提供依据。 5 ．研究了 GhVP 和 GhNHX 基因在棉花上的表达。构建了荧光表达载体 pBI121-Gh VP::GFP，超