玉米WRKY基因启动子的克隆与功能分析.pdfVIP

1 文献综述 1.1 植物启动子概述 1.1.1 启动子的概念 启动子（promoter）位与基因的上游，是一段提供RNA 聚合酶识别和结合 的DNA 序列。一旦RNA 聚合酶定位并且结合到启动子序列上，即可启动转录 基因的表达首先是该基因5’端启动子序列能否被植物的RNA 聚合酶所识别， [1] 从而启动基因的转录 。RNA 聚合酶转录过程的开始必须定位并且和启动子结 合，所以使基因表达的启动子是一个重要的顺式作用元件，启动子调控的实质是 它与RNA 聚合酶或者其他的蛋白辅助因子等反式作用元件相互作用的结果。 启动子作为基因的表达调控重要的顺式作用元件，具有下面四个特征：1) 序列特异性。在启动子的基因序列中，一般含有若干个保守序列框，在序列框中， 若碱基序列发生改变，会使得转录启动滞后并且使得转录速度减慢。2)方向性。 启动子具有方向性，在其正反两个方向中，只有一个方向具有启动的功能。3) 位置特性。启动子在所要启动的转录基因上游或者基因内部的前端。4)种属特异 性。通常亲缘关系越相近的两种生物，启动子通用的可能性越大。 1.1.2 启动子的结构 真核生物中，有三种RNA 聚合酶，并因此将这三种RNA 聚合酶作用的启 动子分为三类:类别I启动子、类别Ⅱ启动子、类别Ⅲ启动子。真核生物的启动 子Ⅱ由两大部分组成：核心启动子元件（core promoterelement）和上游启动子元 件 （upstreampromoterelement）。 (1) 核心启动子元件（corepromoterelement） 核心启动子区域包括了启动子必须的转录起始位点和TATA 盒。TATA 盒是 位于转录起始位点上游的一段保守的基因序列，它富含AT 碱基对。TATA 盒有 7对保守的碱基序列：5’-TATA（A/T）A(A/T)-3’，提供RNA 聚合酶Ⅱ的结 合位置，在很多情况下也会影响到基因的转录水平。TATA box是第一个被确定 的RNA 聚合酶Ⅱ的启动子元件，也是一些反式作用因子与DNA 相互作用的位 点之一。植物的启动子的TATA 框是在转录起点的上游约50bp处的一段序列， 富含AT 碱基对，它的保守的序列为TCACTATATATAG。 (2) 上游启动子元件（upstreampromoterelement） 在许多真核基因启动子中，位于转录起始位点上游大约80bp-220bp的序列 都有上游启动子元件，它们可以很大程度上提高基础启动子的转录活性。较为重 要的上游元件有两种：一种是一般上游元件，比如CCAAT 盒和GC 盒，普遍存 在于真核基因启动子中；另一种上游元件是启动子特有的上游元件。 -1- (3) 其他影响基因表达的调控序列 除启动子外还有一些特定序列能提高基因的转录速率或加工效率，比如增强 子、5’UTR(5’-非翻译序列)、3’UTR(3’-非翻译序列)、Kozak 序列、沉寂子 等。 1.1.3 植物启动子的分类 可以依据不同的标准对启动子进行分类。按启动子来源可分为：原核启动子 和真核启动子；从转录模式上，启动子又可以分为组成型启动子和诱导型启动子。 植物基因工程常其作用方式及功能可分为三类:组成型启动子、诱导型启动 子和组织特异性启动子。 (1) 组成型启动子 组成型启动子能在所有细胞中都能启动基因表达，基因表达的产物具有稳定 性和持续性，基因的表达量随着植物的生长发育不发生明显的变化。研究发现， [2] 在组成型启动子的转录起点的上游的几百个核昔酸处，有共有序列TGACTG 。 现在被广泛应用的组成型启动子有如下几种：水稻actin 基因启动子(Act1)、花椰 菜花叶病毒CaMv35S启动子、水稻Ubiquntin 基因启动子、章鱼碱合成酶基因(oes) 启动子以及土壤根癌杆菌Ti 质粒的胭脂碱合成酶基因(Nos)启动子。花椰菜花叶 病毒355启动子现在被广泛的应用，它的启动活性强，而且表达量高，所以在双 子叶植物中的应用己经得到人们的认可，但在单子叶植物中，它的调控表达能力 [3,4,5] 较弱 。水稻Actl 启动子也是表达量高、启动性强的组成型启动子，actin 基 因表达