99mTc示踪法初步研究注射NGF家兔药代动力学论文.docVIP

　　99mTc示踪法初步研究注射NGF家兔药代动力学论文 .freelTc示踪初步研究注射用NGF在家兔体内药代动力学。方法 将NGF用99mTc标记，利用同位素示踪法和TCA沉淀法测得NGF含量与放射性计数的线性关系，并由静脉注射至家兔体内，通过上述检测方法得到不同时段血浆中微量NGF浓度，使用3P87软件分析药代动力学参数并初步分析组织分布。结果 NGF静脉注射后的家兔体内代谢符合二隔室分布模型；按剂量40μg/kg静注后.freell－１。结论 99mTc具有较好的示踪效果，适用于体内药代动力学研究。 【关键词】 99mTc-NGF；药代动力学；TCA沉淀法 【Abstract】 Objective To study the pharmacokiics of NGF in rabbit by isotopic tracing. Methods NGF Tc，and its γ-ray counts ethod. From cpm of γ-ray and NGF content of samples， the standard curve Tc-NGF vena auris . Samples of rabbit blood e (0.00833， 0.0166， 0.05， 0.0833， 0.166， 0.25， 0.5， 1， 1.5， 2， 2.5， 3， 3.5， 4h). The techniques above acokiic parameter by softetabolism in vivo conforms the double-partments model. ontalcini于1986年获得诺贝尔医学奖［5］。有关NGF的血药浓度检测已有很多报道，但都比较复杂。本文将NGF用99mTc标记，利用同位素示踪法和TCA沉淀法测得NGF含量，从而初步研究NGF脂质体在家兔体内药代动力学，以期为其他相关试验及今后的临床应用提供必要的参考资料。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 1.1.1 仪器 GC-911γ射线计数仪（中国科技大学仪器厂）； Ultrospec2000紫外分光光度仪(Pharmacia公司)； DFM-96多排放射免疫计数仪（众成电机技术公司）； FJ-391A1型活度仪（北京放射性仪表厂）； 3P97软件(江苏省人民医院药剂科合作提供)； FA1004电子天平（上海精科天平）。 1.1.2 试剂 小鼠颌下腺2.5S NGF（南京军事医学研究所提纯，纯度 98%，文章另发）；99mTcO4(北京原子高科核技术应用股份有限公司)； 亚锡（上海化学试剂三厂）； Kieselgel 60 F254 硅胶板（德国EM science）； 柠檬酸缓冲液（南京森科医药公司）； 三氯乙酸（南京生兴生物技术公司分装）； Sephadex G-25(南京森科医药公司提供)。 1.3 实验动物 实验用新西兰兔(雌雄各半、2.5kg，南京爱立默动物实验有限公司)。 1.4 方法 1.4.1 同位素示踪法与TCA沉淀法检测血浆中微量NGF 用放射性元素99mTc标记NGF，对99mTc-NGF用TCA沉淀［6］，然后对沉淀物进行γ计数仪计数，数值与NGF的含量存在线性关系，从而测定在血浆中微量NGF的浓度。 1.4.1.1 标准曲线的制备 99mTc－NGF的制备：配制0.5％亚锡（Sn2＋）－柠檬酸缓冲液（cit）。取NGF20ml（含20mg NGF）、cit溶液100ml及配制的0.5％Sn2＋-cit溶液20ml，将其置于小瓶中，充入氮气3～5min，即制备完药箱置于4℃冰箱待标记时取出。加10mgVitC于cit溶液中，制备成10mg/mlVitC溶液；取出制备的药箱，在其小瓶中加0.3ml 高锝酸（99mTcO4）(具体放射量根据需要)，然后加入配制的10mg/mlVitC溶液0.1ml，混匀。即制备完99mTc－NGF。 样品经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化，收集各组分，测量每管的γ计数，合并各峰收集组分并取出60μl，加考马斯亮蓝R-250染色，用紫外分光光度仪测定595nm处的吸光度，计算NGF的化学量。以收集99mTc-NGF峰的总放射性除以上样层析时的总放射性，即得99mTc-NGF的标记率。99mTc-NGF峰的总放射性除以该峰的总蛋白质量，即得比活度。纸层析法测定99mTc-NGF的放化纯度。 配制10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml及1000ng/ml99mTc-NGF溶液各1份，各吸取20ml于试管中，加150μl生理盐水及30μl兔血清，加20％三氯乙酸200μl，5