Avermectin B1a组分高产菌株的诱变育种论文.docVIP

　　Avermectin B1a组分高产菌株的诱变育种论文 任超 马王向坡 李宝库 路新利 【关键词】 Avermectin,B1a组分；,诱变；,效价；,高产菌株 摘要： 目的 了解avermectin产生菌S.avermitilis的生长特性，提高产生菌B1a组分的产量。方法 采用紫外线、诱变剂亚硝基胍并结合甲硫氨酸诱变等手段对出发菌株S.avermitilis N56进行诱变处理，初筛、复筛。结果 筛选获得总效价达到45258μg/ml的高产除虫链霉菌突变株A3，B1a比例提高到560%。结论 采用紫外线及亚硝基胍诱变方法，结合甲硫氨酸诱变筛选，与出发菌株相比可以获得avermectin总效价及B1a组分显著提高的菌株。 关键词： Avermectin B1a组分； 诱变； 效价； 高产菌株 ABSTRACT Objective To study the characteristics of avermectin producing strains and improve avermectin B1ayield of Streptomyces avermitilis. Method UV and NTG utagens to treat the original strain N56 as ethionine as inducer. Results The highyield avermectin strain A3 ectin total titer up to 45258 μg/ml ectin B1aethod of screening highyield avermectin B1athrough mutation by UV and NTG and induction ethionine. KEY utagenesis; Titer; Highavermectinproducing strain Avermectin的产生菌是除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)，该菌株是1975年日本北里研究所(Kitasato Institute)从日本静岗县地区的一个土壤样品中分离得到的。研究初期已发现该菌株的发酵液具有很高的驱肠道寄生虫活性，该菌株后被送到美国Merck公司作进一步研究。1976年.freelectins［1］。Avermectins是一类结构相似的十六元大环内酯类抗生素，共有8个组分，分别命名为A1a、A1b、A2a、A2b、B1a、B1b、B2a和B2b。其中A1a、A2a、B1a和B2a为4个大量组分，含量在80%以上；A1b、A2b、B1b和B2b为4个小量组分，含量在20%以下，结构见图1。B1的杀虫活性最高，毒性最小。近年，众多科研工作者通过诱变等手段改造菌种的遗传特性，提高avermectin有效组分B1比例，大村智等在这方面做了很多贡献［2］。Avermectin B1a(大于80%)和B1b(小于20%)混合物阿巴菌素(abamectin)已用于畜牧抗虫和农业上的杀螨及选择性的杀虫剂。Avermectins R1 XY R2A1a CH3 CH=CH C2H5A1b CH3 CH=CH CH3A2a CH3 CH2-CH(OH) C2H5A2b CH3 CH2-CH(OH) CH3B1a H CH=CH C2H5B1b H CH=CH CH3B2a H CH2-CH(OH) C2H5B2b H CH2-CH(OH) CH3图1 Avermectins结构图 1 材料和仪器 1.1 菌种除虫链霉菌S.avermitilis N56由河北大学微生物研究所提供；突变株A3由甲硫氨酸平板筛选获得。 1.2 试剂生理盐水，亚硝基胍(NTG)，磷酸盐缓冲液(pH60)，甲硫氨酸(Met)，丙酮(分析纯)，乙酸乙酯(分析纯)，无水甲醇(色谱纯及分析纯)，GF254硅胶粉，三氯甲烷(分析纯)，二氯甲烷(分析纯)。 1.3 培养基斜面和分离培养基(g/L) 可溶性淀粉10，(NH4)2SO4 25，NaCl 06，MgSO4 7H2O 12，K2HPO4 3H2O 30，CaCO3 30，琼脂粉20，pH72～74，用蒸馏水配制。种子培养基(g/L) 玉米淀粉25，花生饼粉10，黄豆饼粉80，酵母粉50，酵母膏50，玉米浆40，CoCl2 6H2O 0003，淀粉酶00025，pH70～72，用自来水配制。发酵培养基(g/L) 玉米淀粉70，花生饼粉10，黄豆饼粉80，酵母粉50，酵母膏30，玉米浆22，CoCl2 6H2O 0003，淀粉酶00025，pH70～72，用自来水配制。 1.4 诱变及筛选方法 1.4.1 紫外线诱变 取制备好的菌悬液5ml