PTEN在乳腺癌中的表达及其与转移的关系论文.docVIP

　　PTEN在乳腺癌中的表达及其与转移的关系论文 赵刚 韩冰 杨明 范志民 赵光程 【摘要】 目的 通过检测PTEN基因在乳腺癌组织中的表达探讨其临床病理意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测PTEN在40例乳腺癌中的表达。结果 乳腺癌组织与正常乳腺组织和癌旁组织PTEN的表达有显著差异（P＜0.01，P＜0.05）。PTEN在早期浸润性癌和晚期浸润性癌阳性表达率差异显著（P＜0.05）；在淋巴结转移组与无淋巴结转移组检出阳性率差异显著（P＜0.01）。结论 PTEN表达与乳腺癌临床病理特征和生物学行为存在密切关系；PTEN基因是乳腺癌细胞增生活跃的重要影响因素。 【关键词】 乳腺癌；癌基因；抑癌基因 乳腺癌是我国死亡率较高的恶性肿瘤，其发生发展是一个多基因、多阶段的变化过程。其中癌基因突变激活及抑癌基因失活起重要作用。PTEN基因为抑癌基因,其蛋白产物具有磷酸酶活性,调节细胞周期和增殖活性。国外学者近年研究发现PTEN基因及其蛋白表达与一些恶性肿瘤发生发展、生物学行为和预后有密切关系〔1～10〕。本实验拟采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)分析并研究乳腺癌组织及淋巴结中PTEN表达及其与乳腺癌转移的关系，为乳腺癌诊治提供临床依据。 1 材料与方法 1.1 标本及临床病理资料 我院2006～2007年间乳腺外科收治手术切除女性乳腺癌标本60例，年龄48～73（平均57.8）岁。肿瘤直径≤2 cm 者21例，2～5 cm者32例，＞5 cm者7例。浸润性特殊癌2例(乳头状癌1 例、黏液腺癌1例)；浸润性非特殊癌51例(浸润性导管癌42 例、浸润性小叶癌6例、髓样癌2例、硬癌1例)；早期浸润性癌7例(早期浸润性导管癌6例、早期浸润性小叶癌1 例)；Ⅰ期19例，Ⅱ期32例.freel)和10例年龄44～68（平均53.4）岁乳腺良性肿瘤术后正常腺体组织(距肿瘤边缘＞1 cm) 作对照组。标本离体后立即置于-80℃冰箱冻存。全部标本均经病理诊断证实。病人术前均未接受过化疗或放疗。 1.2 主要试剂 总RNA提取试剂盒（Trizol）、逆转录试剂盒系Invitrogen产品均购自大连Takara公司。按GenBank的（PTEN）EST序列设计引物，PTEN基因（具体由大连宝生生物工程技术公司合成）上游引物：5′CAC AGA ATT CCA GAC ATG ACA GCC ATC ATC3′，下游引物：5′GTG GAT CCT CAT GGT GTT TTA TCC CTC TTG3′，扩增片段为1 209 bp〔2〕。内参βactin上游引物:5′ACA CTG TGC CCA TCT ACG AGG3′，下游引物：5′AGG GGC CGG ACT CGT CAT ACT3′，扩增片段为627 bp。PTEN登录号：NM058076。 1.3 方法 采用RTPCR方法。按照试剂盒说明书提取RNA后对提取物进行含量及纯度分析。RNA浓度的测量OD260在0.4～0.6之间。OD260/OD280=2.1。取24 μg RNA进行逆转录，逆转录根据RT试剂盒（大连宝生生物技术公司）说明进行。PTEN基因的PCR扩增条件为：①变性温度94℃，45 s；②退火温度55℃，1 min；③延伸温度72℃，2 min。共35个循环，72℃，10 min作终延伸。取PCR产物经15 g/L琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外光下照相。βactin在所有RTPCR扩增产物琼脂糖电泳检测结果中均为一条单独闪色区带，避免了假阴性的发生；同时RTPCR扩增产物片段与预期大小相一致〔1，2〕，分析转录产物，反映特定基因的mRNA表达情况，证明PCR产物无假阳性发生。 1.4 统计学处理 应用SPSS11.0软件包进行率的χ2检验。 2 结 果 2.1 RTPCR扩增产物琼脂糖电泳检测结果 1 209 bp处有一明亮的条带为PTEN PCR产物（见图1），与文献报道一致〔3，4〕。 M：DNA分子标记；N：正常乳腺组织；T1、T2 ：乳腺癌组织;P1、P2：乳腺癌癌旁组织 图1 RTPCR分析PTEN基因在乳腺癌组织中的表达 2.2 乳腺癌的PTEN表达与临床病理特征关系 正常乳腺组织组和癌旁组织组PTEN表达阳性率明显高于乳腺癌组（P＜0.05，P＜0.01）。在早期浸润性癌和晚期浸润性癌中PTEN阳性率差异显著（P＜0.05）。PTEN阳性表达率在淋巴结转移组和无淋巴结转移组差异显著（P＜0.01）（见表1）。表1 乳腺癌病理类型,分级及转移状况与PTEN表达的相互关系 3 讨 论 肿瘤发生与多个癌基因及抑癌基因异常表达有关。发现并研究癌基因和抑癌基因、了解其产物在信号传导通路