百合肌动蛋白基因的克隆与表达分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2013 ，40 （7 ）：1318 –1326 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 百合肌动蛋白基因 lilyActin 的克隆与表达分析 梁 云，袁素霞，冯慧颖，徐雷锋，袁迎迎，刘 春，明 军* （中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081 ） 摘 要：为了在百合功能基因表达研究中选择一个理想内参基因，依据岷江百合 cDNA 文库所获得 的百合肌动蛋白（Actin ）基因的EST 序列，采用 RACE 技术进行该基因 cDNA 全长克隆，并利用实时荧 光定量 PCR 分析其在不同组织中的表达模式，获得百合肌动蛋白基因 cDNA 全长序列 （GenBank 登录号： JX826390 ），命名为 lilyActin 。该基因cDNA 全长 1 367 bp，其中，5′非编码区 91 bp，3′非编码区 233 bp ， 开放读码框 1 134 bp，编码 377 个氨基酸。序列比对发现，该基因与其它 15 种植物肌动蛋白核苷酸序列 的相似性均在 80% 以上，氨基酸序列的相似性达 98% 。进化分析显示，百合肌动蛋白与郁金香肌动蛋白 的亲缘关系最近。实时荧光定量 PCR 结果显示，该基因在百合的花蕾、叶片和鳞片组织中恒定表达，表 明相对于其他物种的内参基因，lilyActin 更适宜作为百合属植物的内参基因。 关键词：百合；Actin 基因；基因克隆；表达分析；内参基因 中图分类号：S 682.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2013 ）07-1318-09 Cloning and Expression Analysis of Actin Gene （lilyActin ）from Lily LIANG Yun ，YUAN Su-xia ，FENG Hui-ying ，XU Lei-feng ，YUAN Ying-ying ，LIU Chun ，and MING * Jun （Institute of Vegetables and Flowers ，Chinese Academy of Agricultural Sciences ，Beijing 100081，China ） Abstract ：In this study ，the objective is to provide a reference gene for gene expression studies of Lilium . Based on the actin gene EST sequence of the cDNA library of Lilium regale Wilson ，a full-length cDNA sequence was cloned from Lilium regale Wilson through rapid amplification of cDNA ends （RACE ） method and the gene expression characters were analyzed by the real time PCR. The full-length cDNA sequence（GenBank ：JX826390 ）designated as lilyActin from Lilium regale Wilson was 1 367 bp in length ， contains a 1 134 bp open reading frame （ORF ）encoding a 377 amino acid proteins，with 91 bp in the 5′ UTR and 233 bp in the 3′ UTR. Homologous alignment shows that it shares over 80% nucleotide sequence similarity and ov