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外翻肠囊法评定猪植物性饲料磷生物学效价的研究 邹秀芸方热军金宏 (湖南农业大学动物科技学院。长沙410128) 摘要奉文旨在探讨外朝肠囊法评定植物性饲料磷生物学效价的可行性，试验分两个步骧；第一步。确 定外翻肪囊法洲定磷哑收率的最佳培养时问；第二步，在最佳时间下，应用外翻腑囊法，研究不同植物性饲料 磷在猪小肠中的吸收率。蛄果表明：(1)磷的吸收率在40耐n内呈上升趋势，40mi玎达到最太吸收值。而后开始 下降，故确定的最佳培养时问为40lr．in。(2)甩外翻肠囊法测定了玉米、豆柏、次耪、麦麸、小麦、糙米、拂 粕、莱粕、来糠共9种植物性饲料磷的吸收率，其结果分别为42，28％、19．05％、36．65％、3181％、48．04％、 47．33％、32，23％、46．29％、323l％。 关键词外翻肠囊法磷生物学效价植物性饲料猪 饲料磷的生物学效价常用的评定方法有体内法和体外透析法。体内法虽然准确可靠，但周期长、 试验复杂、实验条件难以控制，不仅消耗人力、物力、财力，而且很难了解单一元素在动物体内的吸 收部位以及吸收机制。体外透析法虽然简单易行，但不足之处在于透析袋毕竟不是活体组织，无法反 映饲料磷在动物体内真正的吸收情况。 外翻肠囊技术是在体外培养肠环技术上发展而来的，它是将小肠从活体取出后分割成不同的段 落，将各肠段外翻成囊状，放人培养液中培养一定时间后，取出放进装有被测物的烧瓶中，通过肠道 黏膜、浆膜及囊中被测物的变化来了解养分的吸收情况…。该方法最早用于研究葡萄糖和氨基酸的 透膜转运”1，后来慢慢用于各种养分的吸收评定，如锌”j、锰”…、药物”“’等；该方法操作简单、 快速、消耗低，能详细的观察到养分进出肠段的变化o。”1。但是尚未见用该方法研究磷的吸收的报 道。本试验的目的是用外翻肠囊法评定植物性饲料磷生物学效价，并将测定结果与相应饲料磷的消化 率“…“进行相关性分析，探讨外翻肠囊法的可行性。 l材料与方法 1．1试验材料 (1)消化酶：胃蛋白酶(Amenco公司生产，比活为1：3000)、胰蛋白酶(Amersco公司生产， 比活为1：250)。 (2)猪小肠：取屠宰后猪小肠，小肠离体后立即保存于O℃生理盐水中备用”””1。 (3)饲料样品：试验选用9种植物性饲料，分别为玉米、豆粕、次粉、麦麸、小麦、糙米、棉 粕、菜粕、米糠。 1．2试验处理 第一步，采用小麦型日粮为磷源，根据磷的吸收率与培养时间的关系，确定最佳培养时间；第二 步，在此培养时间下，测定不同植物性饲料磷的体外吸收率。步骤1采用完全随机试验设计，设培养 处理组。每个处理组6个肠囊，每个肠囊作为外翻肠囊的一个重复。步骤2采用完全随机设计，9种 植物性饲料共设9个处理组，分别为：玉米、豆粕、次粉、麦麸、小麦、糙米、棉粕、菜粕、米糠。 9头猪共54个肠囊随机分配到9个处理组，每个处理组6个肠囊，每个肠囊作为外翻肠囊法的一个 ·505· 括琶养与饲辎研究进展 重复，为了消除内源影响，另设l零水平对照组。 1．3测定方法 1．3．1植物性饲料的处理 饲料的体外消化分为两步： (1)胃蛋白酶消化。准确称取lg待测饲料样品，放人20llll玻璃试管中，加人4柚胃蛋白酶溶液 (2)胰蛋白酶消化。将经胃蛋白酶消化后的食糜与1IIll胰蛋白酶溶液(浓度为2．4m∥Ⅱd，相当 养270耐n㈣。 1．3．2外翻肠囊的制作 Krebs缓冲液的组成：Tris 15．5mmoL／L；Nacl120．7mmoL／L；Kcl5．6mmoL／L；cacl22，5mmoL，L；水 合Mgcl2 成外翻肠囊。 1．3．3磷的体外吸收及其测定 翻肠囊并摇匀，继续在39℃的水浴中恒温培养40商n。 (2)磷的测定。将肠囊取出，用缓冲液将肠囊表面冲洗干净后，放入干净的坩埚中于105℃下烘 24h，烘干后，将坩埚放人马福炉中灼烧8h，溶解灰分，测定其中总磷含量。 1．3．4磷吸收率的计算 磷吸收率按下列公式计算： 吸收率(％)=[(D—D’)／(wxA)]×100 式中：D表示待测饲料肠囊磷含量(mg)；D’表示空白肠囊的磷含量(mg)；w为样品的风干重