厌氧性细菌及检验.ppt.PPT

厌氧菌 概念: 是一大群必须在无氧环境条件下才能生长繁殖的细菌 特点: 种类多 分布广 感染可发生于人体各个部位 厌氧菌特点 厌氧菌感染的临床及细菌学特征 感染发生于黏膜附近 深部外伤 感染局部有气体产生 分泌物有恶臭或暗血红色 某些抗生素治疗无效的感染 标本直接涂片细菌染色不均 镜检见细菌,需氧培养无细菌培养 厌氧菌感染的原因 局部形成厌氧微环境 局部或全身免疫功能下降 菌群失调 寄居部位发生改变 厌氧菌－－标本采集与送检 采集 部位恰当 正确采集 避免污染 严格厌氧 及时送检 运送 针筒运送法 无氧小瓶运送法 标本充盈运送法 组织块运送法 厌氧袋运送法 棉拭运送法 厌氧菌－－常用培养基 非选择性培养基 心脑浸液＋％5脱纤维羊血＋氯化血红素＋维生素K 选择培养基 七叶苷胆汁平板－－培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板－－培养 FS培养基－－培养梭杆菌属 VS培养基－－培养韦容球菌 CCFA培养基－－培养艰难梭菌 厌氧菌－－厌氧培养法 厌氧罐培养法 厌氧器袋法 厌氧手套箱法 疱肉培养法 厌氧菌－－标本观察和涂片镜检 肉眼观察：观察标本的性状（脓性、带血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等） 涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细菌形态、染色性，以便选择培养基和培养方法 厌氧菌－－分离培养 初代培养： 厌氧培养48h 次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试验，每个菌落接种2个平板，分别进行需氧培养和厌氧培养，挑取有氧培养中不生长、厌氧培养生长的菌落进行鉴定 厌氧菌－－鉴定 菌体形态： 菌落性状：形状、色素、荧光、溶血 药敏鉴定试验： 卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属多耐药 聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链球菌 生化反应 气相色谱技术 破伤风芽孢梭菌－－主要性状 革兰阳性细长杆菌，有周鞭毛，芽孢位于菌体顶端，圆形大于菌体，呈“火柴棒状” 专性厌氧 在血平板上呈扩散生长，菌落边缘不整齐，呈羽毛状 在疱肉培养基中，肉渣变黑，有腐败恶臭味 破伤风芽孢梭菌－－临床意义 致病物质： 破伤风痉挛毒素，属神经毒素，阻止中枢抑制性神经介质的释放，导致骨骼肌强制性痉挛 所致疾病：破伤风 感染途径：伤口 致病条件：伤口内形成厌氧微环境 破伤风芽孢梭菌－－检查方法 显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 分离培养：厌氧培养，菌落特征 动物实验： 毒力试验： 毒素注射小鼠→小鼠出现症状 保护试验： 毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状 产气荚膜梭菌－－形态与培养 革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽孢位于菌体中央或次级端，小于菌体，无鞭毛 专性厌氧 血平板菌落特征：圆形、凸起、光滑、湿润，双层溶血环 卵黄琼脂平板：Nagler反应 牛乳培养基：“汹涌发酵”现象 生化反应：生化反应活泼，分解多种糖 产气荚膜梭菌－－临床意义 致病物质：荚膜、多种毒素和侵袭性酶 所致疾病： 气性坏疽 食物中毒 坏死性肠炎 产气荚膜梭菌－－检查方法 标本涂片染色镜检：观察形态、染色性、荚膜 分离培养：注意观察双圈溶血环 生化反应：汹涌发酵现象 动物实验： 培养物→小鼠腹腔注射→处死小鼠→培养→解剖小鼠→肉眼观察泡沫肝＋涂片染色镜检 肉毒梭菌－－形态与培养 革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，芽孢位于菌体次级端，大于菌体，呈“网球拍状”无荚膜 专性厌氧 菌落大而不规则；消化肉渣，肉渣变黑，有腐败恶臭 肉毒梭菌－－临床意义 致病物质：肉毒毒素，为神经毒素，引起肌肉驰缓型麻痹。 毒素分为8个型别，我国以A型最多见 所致疾病 肉毒食物中毒 婴儿肉毒病 肉毒梭菌－－检验程序 肉毒梭菌－－检验方法 标本采集：可疑食物、呕吐物等 分离培养：疱肉培养、分离培养 毒素测定 毒素定性检验： 毒素注射小鼠→小鼠出现症状 毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状 毒素型别鉴定： 鉴定依据：形态、芽孢特征、疱肉培养物、肉毒毒素 艰难梭菌 革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无荚膜 严格厌氧 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 脂酶－、卵磷脂酶－ 人和动物肠道中的正常菌群 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性粗大杆菌并有芽孢，具有诊断价值 革兰阴性无芽孢厌氧菌 类杆菌属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌 普雷沃菌属 卟啉单胞菌属 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒 革兰阳性无芽孢厌氧菌 丙酸杆菌属 痤疮丙酸杆菌寄居人和动物皮肤、皮脂腺等部位，与痤疮有关 优杆菌属 乳