抗人IgM抗体抑制鼻咽癌HNE1细胞裸鼠成瘤的机制研究.pdfVIP

抗人IgM 抗体抑制鼻咽癌HNE-1 细胞裸鼠成瘤的机制研究 摘 要 目的：目前，随着各种诊断方式的更新及治疗方法的进步，鼻咽癌的5年生 存率有了一定提高但是仍不理想，早期诊断仍较困难，治疗效果仍欠佳。 在前期研究中，我们发现免疫球蛋白（Immunoglobulin ，Ig ）M在多种头颈 部肿瘤包括鼻咽癌中存在广泛表达，利用抗人IgM抗体干预后，人鼻咽癌 HNE-1细胞裸鼠移植瘤的生长受到明显抑制，并能促进其凋亡。Ig对人鼻 咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤具有生长因子样作用，能够促进其生长，但其 [1,2] 具体机制还尚不明确 。随着对肿瘤形成机制的深入研究，人们发现血管 生成与肿瘤的生长转移关系密切，抗血管生成治疗也成为肿瘤治疗中的重 要组成部分之一。本实验是在前期研究的基础上，获取人鼻咽癌HNE-1细 胞裸鼠移植瘤组织标本，通过检测移植瘤组织增殖指标以及血管生长相关 指标，生存素-Survivin 、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen ， PCNA ）、血管生成素-2 （angiopoietin ，Ang-2 ），移植瘤内微血管密度 （microvessel density ，MVD ），进一步探讨抗人IgM 抗体抑制人鼻咽癌 HNE-1细胞裸鼠成瘤的可能机制，为鼻咽癌发病机制的研究及临床治疗方 案提供新的思路。方法：取人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织，用含1% 蜂蜡的石蜡包埋组织，轮转式切片机将其切成4μm厚的病理切片，应用免 疫组化 链霉亲和素 - 生物素化过氧化酶复合物 染色法 （Streptoavidin-biotin-enzyme complex，SABC ）检测瘤体组织中Survivin、 PCNA 、Ang-2 表达情况；应用免疫组化链霉亲和碱性磷酸酶染色法 - 1 - （Streptavidin-Alkaline Phosphatase ，SAP ）检测CD31标记的移植瘤内微血 管，并计数MVD表达情况。（1）Survivin，PCNA ：阳性染色呈黄色至棕黄 色，前者主要位于胞膜或胞质；后者阳性染色部位主要位于细胞核。每张 染色切片在Olympus BH2显微镜下，低倍镜（×100）随机选择染色明显的 5个视野，高倍镜 （×400 ）下采图，共5张切片，每张切片采集5张图片， 采用Image-pro Plus6.0软件对Survivin，PCNA 阳性染色的病理图片作免疫组 化半定量分析，记录平均光密度值。（2 ）Ang-2 ：Ang-2 阳性染色呈棕黄色， 主要位于细胞浆或细胞膜。由两位医师分别观察每张切片，选择有代表性 的区域，用OLYMPUS BH2显微镜在高倍镜下（×400 ）对切片进行摄像， 共5张切片，每张切片采集5张图片，采用Image-pro Plus 6.0软件对采集的 [16] Ang-2 阳性染色切片作免疫组化半定量分析，记录平均光密度值 。（3 ） MVD计数：阳性染色（CD31标记）呈鲜红色至红色颗粒，主要位于血管 内皮细胞膜，阴性染色为蓝色。计数方法参考Weidner[18] 的方法进行，先寻 找染色清楚的瘤体内微血管，在染色密集区域寻找（低倍镜，×40），然后 在200倍镜（20×10 ）下计数肿瘤内的微血管数目，包括毛细血管和静脉数 目，瘤旁组织内微血管不计数，记录5个视野内的微血管数，取平均值，结 _ 果以 （x±s ）表达。统计数据运用SPSS16.0 for windows软件作统计学分析， P0.05显示差异有统计学意义。结果：（1）Survivin、PCNA表达情况，抗 人IgM抗体干预实验组Survivin 、PCNA 的平均光密度值分别为（0.153 ± 0.009 ）、（0.084 ±0.025 ），IgG组Survivin 、PCNA表达的平均光密度值为 （0.221 ±0.019 ）、（0.149 ±0.016 ），PBS对照组Survivin、PCNA表达的平均 光密度为（0.246 ±0.021 ）、（0.163 ±0.018 ），实验组（抗人IgM抗体干预）