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生物化学物质的制备 化学与生命科学学院 第一章:生化物质的制备 生化物质（生命大分子物质）通常是指动物、植物和微生物在进行生长发育、新陈代谢时，所形成的蛋白质（包括酶）和核酸等有机化合物的总称。 生化物质的特点： 1、生化物质组成非常复杂。其中包括数百种甚至数千种化合物，并且在分离过程中，这些化合物仍在发生代谢变化，如 蛋白质和核酸的水解。 2、有些化合物的含量极微，如激素等。 3、许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很易变性破坏，因此常选用比较温和的条件进行制备。 第一节 生物材料的选择 （一）选择生物材料的原则： 有效成分含量多，稳定性好； 来源丰富，保持新鲜； 提取方法简单； 有综合利用价值等。 （二）生物材料一般可以分为两大类： 天然生物材料 人工生物材料 天然生物材料一般是指在自然界易采集的、目的物含量较高的生物个体、器官或组织。 人工生物材料又分为三种： 1、新品种材料 2、组织培养材料 3、生物产品与生物制品材料 第二节 细胞及组织的破碎 细胞及组织破碎的方法多种多样，根据实验目的和材料的不同可以采用不同的细胞破碎方法： （一）机械方法： 主要通过机械力的作用，使组织粉碎。 粉碎少量原料时，可使用高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。 工业生产上一般常用的粉碎设备有电磨机、球磨机、万能粉碎机、击碎机等。 （三）生化及化学方法 1. 自溶法 即新鲜的生物材料存放在一定的pH和适当温度下，利用组织细胞中自身的酶系将细胞破坏，使细胞内含物释放出来的方法。 自溶的温度，动物材料选在0～4℃，微生物材料则多在室温下进行。 自溶时，需加少量的防腐剂，如甲苯、氯仿等，以防止外界细菌的污染。因自溶的时间较长，不易控制，故制造具有活性的核酸、蛋白质时比较少用。 第三节 生物分子的提取 提取：是在分离纯化前期，把破碎的组织或细胞置于一定的溶剂（提取液）中，利用一种溶剂对不同物质溶解度的差异，从混合物中分离出一种或几种组分的过程称为提取，提取又称萃取或抽提。 提取液应具备的条件：对有效成分溶解度大，破坏作用小；对杂质溶解度小或不溶解；来源广泛、价格低廉、操作安全等。 生物分子可以分为： 生物大分子和生物小分子 生物小分子的结构由较强的共价键决定； 生物大分子中除共价键外，还含有较弱的共价键和次级键，故需温和的条件才能保证生物大分子的活性不被破坏。 溶剂提取法 原理:利用溶剂的溶解作用把所需物质从细胞中转移出来。 影响溶剂提取效率的因素： 1. 溶剂的性质：根据相似相溶原理 2. 离子强度：离子强度是影响物质溶解度的主要因素，但离子强度对不同物质溶解度的影响不同，如高离子强度下DNA-核蛋白溶解度增加，而低离子强度下RNA-核蛋白溶解度增加；绝大多数蛋白质和酶，在稀盐溶液中溶解度增加（盐溶）。 3. PH值：溶剂的PH值影响溶质分子的解离状态，离子状态的物质，无论阳离子还是阴离子都易溶于水，而非离子状态的物质易溶于有机溶剂。 4. 温度：不同温度的可以改变物质的溶解度。 5. 去垢剂：去垢剂是一类既有亲水基又有疏水基的物质，可以分为阴离子、阳离子和中性去垢剂等，如SDS，Tween20，Triton X-100。 第四节：生物大分子的浓缩 1、沉淀法:在提取液中加入适量的中性盐或有机溶剂，使有效的成分变为沉淀，经过离心或过滤收集的沉淀物。 盐析法；等电点沉淀法；有机溶剂沉淀法；非离子多聚体沉淀法；生成盐复合物沉淀法；热变性沉淀法；酸碱变性沉淀法等 。 2、吸附法：将干葡聚糖凝胶加入提取液中，由于凝胶吸水，提取液的体积可缩小三倍左右。 　　　　　　　　　 3、超过滤法：把提取液装入过滤装置，在空气或氮气的压力下，使小分子物质通过半透膜，大分子物质留在膜内。 4、透析浓缩法 5、减压蒸馏浓缩法：将提取液装入减压蒸馏装置中，在减压真空状态下进行蒸馏。 6、冰冻干