异基因造血干细胞移植患者外周血TCR Vβ亚家族克隆性增殖动态变化及其与GVHD的关系论文.docVIP

　　异基因造血干细胞移植患者外周血TCR Vβ亚家族克隆性增殖动态变化及其与GVHD的关系论文 贾新颜,王健民,李扬秋,陈少华,章卫平,陈莉 【摘要】 本研究观察异基因造血干细胞移植(alloHSCT)患者外周血T 细胞受体（TCR） Vβ亚家族克隆性增殖的动态变化，分析T细胞的克隆性演变与GVHD的关系。利用RTPCR方法扩增70例次alloHSCT后患者（其中17例次出现GVHD）外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3（CDR3），PCR产物经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度, 确定T细胞的克隆性。结果表明：移植患者T细胞增殖一般都经历由单克隆向多克隆演变的过程，在移植后60-90天时，逐渐由单克隆转为单克隆和多克隆表达大致各占一半。120天以后，无GVHD患者大多转为多克隆性表达；而GVHD患者受免疫抑制剂和GVHD的影响，直到1年以上仍有部分呈单克隆表达趋势。GVHD患者发生GVHD或靶器官受累最明显的时候，外周血TCR Vβ亚家族的表达主要呈现单/双克隆的表现.freelilies in Peripheral Blood of Patients Transplanted atopoietic Stem Cells and Its Relation to GVHD Abstract This study ic change of clonal proliferation of T cell receptor V subfamilies in peripheral blood of patients received allohematopoietic stem cell transplantation (alloHSCT) and to analyze the relationship betononuclear cell samples from 70 cases (17 GVHD patients) undergoing alloPBCST patients entarity determining region 3 repertoire analysis of T cell receptor Vβgene) using reversetranscriptasepolymerase chain reaction (RTPCR)．The products ation from monoclone to polyclone. At day 60-90 after HSCT, half of the cases onoclonal and the remainders ost of patients ained monoclonal after one year because of immunosuppressive agents and GVHD itself. The peripheral blood of GVHD patients mainly expressed monoclone/biclone at the time of target organ damage conspicuously, after medication intervention, partial monoclone or bioclone expressed TCR Vβ subfamilies ilies can return to normal polycloning along atopoiesis and immunity in patients. Key opoietic stem cell transplantation; GVHD; T cell receptor Vβ subfamily; T cell clonality; genescan T淋巴细胞的活化需要两个信号：第一信号通过T细胞受体（TCR）抗原多肽MHC复合物，此过程是受MHC限制的；第二信号是由多种共刺激分子提供。TCR β链V区基因亚家族分布和克隆性分析是了解肿瘤性或抗原特异性T细胞以及免疫功能重建情况的重要方法。TCR在重排的过程中，不同克隆所形成的抗原受体互补决定区3 (plementary determining region 3,.freell，吹打至无沉淀，加入EP管，置于-80℃冻存备用。 RNA提取及cDNA合成 将已加入TRIzoL试剂冻存的细胞解冻，采用酚氯仿异戊醇提取法提取RNA［4-6］，按TaKaRa RNA PCR Kit AMV Ver 2.1 试剂盒说明书进行cDNA合成反应。总反应体积为20 μl，其中含5 μl RNA模板，2 μl dNTP （包括dATP，