食用菌分子转化研究状况.pdfVIP

维普资讯 专 题 蛄}述 币 币 食用菌转化研究的营养缺陷型标记基因有 一专一 URA1(二氢乳清酸)基因、pabl(P一氨基 一～题综一一 苯甲酸)基因、trp2(色氨酸)基因，它们已 成功地应用于杨树菇、灰盖鬼伞、双孢蘑菇的 食用菌分子转化研究状况 遗传转化。因为是同源基因，能够引导载体 鼍 睾 一述一 在染色体的同源部位整合，避免了甲基化，有 遗传育种是提高食用菌产量和质量的有 利于基因的表达。因此无论是从转化率的角 效途径之一。传统的遗传育种方法周期长、 度还是从转基因安全性的角度，营养缺陷型 见效慢，现代分子转化技术则提供了一种更 标记都是一种优 良的选择标记。然而，食用 为高效快捷的育种方式。最早报道的食用菌 菌营养缺陷型菌株的不易获得，限制了这种 转化是1991年Challen等利用PEG法把外源 筛选标记的应用。 DNA导人双孢蘑菇的原生质体中，获得转化 2．抗生素抗性标记 抗生素筛选标记在 子；随后又相继报道了几例食用菌如双孢蘑 植物、动物、真菌转化中已广泛应用。在食用 菇、平菇、草菇、杨树菇和香菇的转化试验。 菌转化研究中使用过的抗性标记基因有潮霉 但至今尚未建立起有效的食用菌转化系统。 素抗性基因(Hygr或 hpt)、腐草霉素抗性基 目前在食用菌的转化研究中存在的问题主要 因(Phk)、博来霉素抗性基因(Bler)。应用最 有：(1)假阳性菌落的干扰 ；(2)外源 DNA 多的是潮霉素抗性基因Hygr，已经在平菇、 整合率不高；(3)外源基因整合后表达率不 香菇、双孢蘑菇中获得表达，其中在香菇的转 高；(4)转化子不稳定。其中影响转化的主要 化中效果较好。 因素是低整合率和低表达率。遗传工作者围 3．代谢物抗性标记 这是一种新的筛选 绕如何提高整合率和表达率，不断改进转化 标记。Veal和Casselton从灰盖鬼伞中分离出 方法、转化材料、标记基因、启动子，以期提高 5一FI抗性菌株，获得 trp3的突变基因 转化率，建立一个完善的转化体系。现就筛 trp3iar。trp3iar可以导致对代谢物5一FI(5 选标记、启动子、转化方法、整合方式及将来 一 fluoroindole，5一氟基吲哚)的抗性，是第 研究方向等方面，用具体的研究实验分析食 一 个分离 自担子菌的阳性标记基 因。1998 用菌转化工作现状、取得的成绩和存在的问 年，Ji等将trp3iar作为筛选标记用于平菇和 题。 草菇的转化，得到了5一FI抗性转化子。因 一 、 筛选标记 为这个标记基因来 自担子菌本身，对食用菌 食用菌的筛选标记主要有3种类型：营 来说属于近同源基因转化，不易甲基化，更 养缺陷型标记、抗生素抗性标记、代谢物抗性 易于表达，因此在食用菌的转化上很有应用 标记，最常用的筛选标记是营养缺陷型标记、 前景。 ’ 抗生素抗性标记，而代谢物抗性标记则有应 二、启动子 用前景。 启动子是控制基因转录的上游元件。而 1．营养缺陷型标记 营养缺陷型标记基 转录调控是基 因表达最为重要的一环。因 因来自宿主本身，因而这种转化属于同源转 此，启动子是转化系统的重要成分。目前在 化，标记基因的启动子也是该基因原有的启 食用菌转化领域，对启动