噬中性粒细胞—培训课件.pptVIP

中性粒细胞的细胞膜能释放出一种不饱和脂肪酸——花生四烯酸，在酶的作用下，由它再进一步生成一组旁分泌激素物质，如血栓素和前列腺素等，这类物质对调节血管口径和通透性有明显的作用，还能引起炎症反应和疼痛，并影响血液凝固。 3.免疫病理损害 除了在抗感染中起重要的防御作用外，中性粒细胞可引起感染部位的炎症反应并参与寄生虫感染引发的变态反应，从而引起免疫病理损害。 （1）抗体直接作用于组织或细胞上的抗原，中性粗细胞通过其Fc受体与靶细胞表面的IgGFc段结合，发挥ADCC作用，从而导致细胞毒型变态反应损害；（2）当抗原抗体比例适合而形成19S大小的免疫复合物，不易被吞噬，沉积于毛细血管壁，激活补体，吸引中性粒细胞至局部。 中性粒细胞通过Fc受体和C3b受体与免疫复合物结合并吞噬之。吞噬过程中脱颗粒，释放出一系列溶酶体酶类，造成血管和周围组织的损伤；（3）在IgE介导的速发型变态反应的部位，也有中性粒细胞的聚集，说明中性粒细胞也参与了速发型变态反应导致的病理损害(刘约翰等，1993)。 PMN的凋亡控制炎症反应的时间和强度，生理情况下，PMN自发性凋亡而保持体内的PMN的数量稳定，急性炎症情况下，它们从血液中迁移到炎症组织，促炎介质使PMN凋亡延迟，这是PMN聚集的重要机制之一，在炎症急性阶段可能有重要作用。许多促炎介质（C5a、GM-CSF、fMLP）被认为是PMN的存活因子，它们通过不同路径延迟PMN的凋亡。PMN适时凋亡可减轻对组织的损害，巨噬细胞吞噬凋亡的PMN时不释放炎性介质，所以它们的凋亡不会损害机体。PMN凋亡紊乱和多种急性和慢性炎症性疾病相关。 1.NE 中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)属于丝氨酸蛋白酶超家族,是PMN产生的一种细胞毒性分子，分子量为30kD， NE能够降解几乎所有的细胞外基质蛋白和许多重要的血浆蛋白。每个PMN内NE总量在3pg以上,储存于中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒中,当细胞活化、呼吸爆发及细胞裂解时,迅速释放到细胞外。生理条件下,NE参与调节炎性反应,促进吞噬细胞消除有害病菌,构成机体防御系统的重要部分。 研究中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE)对人肝癌HepG2细胞内PI3K/Akt、MEK/ERK信号通路的作用并探讨相关机制， 同时观察NE对HepG2细胞增殖与凋亡的影响，为 肝细胞肝癌发病机制的研究提供新的思路。 方法：激光共聚焦法观察NE在细胞内的定位；Western印迹杂交法检测NE作用后HepG2细胞内PI3K/Akt、MEK/ERK信号通路活化状态的变化并分析其相关性；设定不同浓度的NE作用于HepG2细胞，利用CCK-8法检测细胞的增殖情况；用流式细胞仪技术分析特定浓度NE作用后的细胞在受到化疗药物杀伤时细胞凋亡的变化；所得数据采用SPSS17.0软件进行统计分析。 结果：激光共聚焦实验表明NE可以进入细胞 内，且主要位于细胞质靠胞膜侧；20nM和40nM的NE处理HepG2细胞后p-Akt的水平分别提高+45%和+74%（P0.01)，40nM组与20nM相比，p-Akt水平提高了20%（P0.01)，Akt、p-MAPK(Erk1/2)和MAPK(Erk1/2)无明显改变(P0.05)； CCK-8法检测不同浓度NE（20nM,40nM）作用细胞后的吸光度（OD值），结果发现经NE作用后的细胞吸光度明显增加；流式细胞仪检测HepG2细胞在经过15ug/ml丝裂霉素(MMC)处理后，凋亡率为39.7±2.3%，经过同样处理的NE（40nM)/HepG2细胞，凋亡率降至15.7±1.5%（P0.01)。 结论： NE可以进入细胞并定位于胞膜侧，通过上调PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化水平从而促进HepG2细胞增殖和逃避凋亡。 2.人体天网 德国科学家在观察人体免疫系统对付细菌的过程中意外发现，在那些被人体灭菌勇士白血球杀死的细菌周围，经常会看到一些丝状体物质。起初，他们以为这是显微镜的镜片不干净导致的观察错觉。但后来他们发现，这些丝状物总是在细菌进入人体后，很快就出现在细菌周围。它们相互缠绕，构成了网。这些网就像蜘蛛网那样，能够迅速把细菌横七