基因工程的基本操作程序新课.pptVIP

1、基因工程的“工具”有哪些？ 　　　 2、基因工程的基本操作流程有哪几个步骤？ 目的基因得获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 限制酶，DNA连接酶，运载体 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 一 、目的基因的获取 1、定义： 目的基因就是人们需要的基因，可以来自动物、植物、微生物。主要指的是编码蛋白质的基因。 2.获得目的基因的方法 1）从基因文库中获取目的基因 2）利用PCR技术扩增目的基因 3）DNA合成仪用化学方法人工合成 ①构成基因文库的成员是什么？ 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库构建的示意图 受体菌 所含有的基因不同 ②每个受体菌之间的最主要差别是什么？ ③你能根据图解描述一下“基因文库”的构建过程吗？ ⑴从基因文库中获取目的基因 ②基因文库的定义 ⑴从基因文库中获取目的基因 基因组文库 部分基因文库 （如cDNA文库） ③基因文库 的种类 ①构建基因文库的过程 基因文库包括哪几种类型？请阅读课本P9相关文字和图1-7。 ④基因组文库和cDNA文库的比较 mRNA 逆转录酶 逆转录 DNA cDNA 你能推测出mRNA逆转录形成cDNA的过程大致分为哪几步吗？ 中心法则 IMN 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 cDNA文库——包含一个生物某个时期所选择性表达的基因。 基因组文库——包括一个生物的所有基因 用小白鼠的肝脏细胞和肌肉细胞构建的基因组文库有差异吗？构建的cDNA文库呢？ 2.获得目的基因的方法 1）从基因文库中获取目的基因 2）利用PCR技术扩增目的基因 3）DNA合成仪用化学方法人工合成 PCR（聚合酶链式反应）技术扩增 由穆里斯等人于1988年发明，并于1993年获得若贝尔化学奖。 PCR反应的过程：（变性、复性、延伸、多次重复） 选修1 P60 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ 引物Ⅱ G—G 变性 复性（退火） 延伸 1.目的基因DNA受热变性，解链； 2.引物与单链互补结合； 3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 2） 利用PCR技术获取与扩增目的基因 体内DNA复制； DNA解旋酶 热变性 DNA解旋酶、 DNA聚合酶 Taq酶 ⑤定位扩增起止点的关键因子： ②原理： ③过程： ④结果 ①概念: 解链条件 酶 PCR 体内DNA复制 ⑥条件： ⑦前提： 引物 已知目的基因的一段碱基序列，便于设计并合成引物 ⑧比较 四种脱氧核苷酸、 DNA的两条链为模板、缓冲液 热稳定DNA聚合酶(Taq酶）、 引物、 温度控制 2.获得目的基因的方法 1）从基因文库中获取目的基因 2）利用PCR技术扩增目的基因 3）DNA合成仪用化学方法人工合成 目的基因的mRNA 单链DNA 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 ①反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 ②根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 3）DNA合成仪用化学方法人工合成 （二）基因表达载体的构建——核心 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 —— 核心 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 二、基因表达载体的构建 科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。 起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。 然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在