免疫血清学实验—培训课件.pptVIP

双向免疫扩散试验 直接凝集试验 抗原（antigen, Ag）: 能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之特异性结合的物质。 抗体(antibody, Ab)： B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异 性结合抗原的一组糖蛋白。 抗原-抗体反应的基本检测方法 凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。 沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。 补体参与的反应 免疫标记技术（immunolabelling technique）:用示踪物质标记 抗原或抗体，进行抗原-抗体反应的检测。 一、沉淀反应-双向免疫扩散试验 原理 用半固体琼脂凝胶作为介质，可溶性抗原、抗体在其中能自由扩散。将可溶性抗原和抗体分别加入琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原和抗体相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。 主要材料 器材：载玻片、EP管、微量加样器、枪头、打孔器、 注射器针头 试剂：生理盐水、琼脂粉、 抗原（正常小鼠IgG）、 抗体（兔抗小鼠IgG血清）  配制1%琼脂：用生理盐水配制，加热溶解 制板：趁热将3.5ml融化琼脂水平铺在玻片上，室温下冷却凝固 打孔：用打孔器按图示打孔 稀释抗体：取5支EP管，将抗体倍比稀释 加样：周围孔加入不同稀释度的抗体，中间孔加入抗原 琼脂板放入湿盒内，置4℃，24-48小时后观察结果。 实验步骤 Ag 1 2 3 4 5 control 6 倍比稀释法 1:4 1:8 1:16 1:64 100μL 100μL 100μL 100μL 100μL 100μL 100μL 样品管 第一管 第二管 第四管 结果判断 1 2 3 4 5 6 应用 测定抗体的效价 用特异性抗体检测抗原 检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度，比较抗原之间的异同点 两个样品为同一抗原 存在三种不同的抗原 两个样品部分相同 二、凝集反应 原理 颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体特异性结合，在有电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集团块。 基本类型 直接凝集反应、间接凝集反应、凝集抑制反应等。 直接凝集实验（ABO血型鉴定） 器材：酒精棉球、灭菌干棉球、微量加样器、 灭菌枪头、玻片、一次性采血针 试剂 抗A试剂（蓝色）、抗B试剂（黄色） 主要材料 实验步骤 干净玻片上分别滴加抗A、抗B试剂各一滴 酒精棉球消毒无名指，采血针采血 用加样器加末梢血各1滴 不断转动玻片，使血液与试剂充分混匀，静止1-2min左右，观察结果 A B 抗A 抗B 结果判断 血型 抗A试剂 抗B试剂 A + - B - + 0 - - AB + + 注意事项 注意无菌操作 滴加血液时，不要使枪头尖触及试剂