动物用药品检测方法.ppt

动物用药品检测方法 微生物检定法(microbiological method) 薄层分析法(thin layer chromatography, TLC) 酵素连结免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 毛细管电泳法(capillary electrphoresis, CE) 高效液相层析法(high performance liquid chromatography, HPLC) 气相层析法(gas chromatography, GC) 微生物检定法 Cylinder plate method: 抑制圈大小判定药物浓度 Charm farm test: Bacillus sterothermophilus 生长酸性代谢物指示剂呈蓝色 优点: 便宜简便 缺点: 敏感度及专一性低, 且不易定量 酵素连结免疫吸附法 利用特定抗原与抗体之结合进行抗特定抗原或抗体之检测或定量 优点：操作方法简便快速、敏感度高，可检测液态样品，可在田间使用 缺点：容易因交叉反应而有伪阳性发生的情形 薄层分析法 移动液相体在固定相上移动，因不同分子所具有不同溶解度、pKa值、极性、亲合力，而达分离效果 优点: 简单、快速、花费少，不需复杂实验室设备，一般用于快速筛检大量样品 缺点: 利用Densitometer测量呈色强度，常因作用时间长短影响荧光强度导致误差, 敏感度及特异性都不高, 只能用于快速之初步检验 高效液相层析法 利用物质在固定相与移动相之间配比系数不同而分离 优点: 可分离各种化学及生物样品，具省时、高分辨率、高敏感度、高选择性及准确性高。是目前动物用药检测最常用的分析方法 缺点: 只能检验一个样品，检验品多时花费时间长，分析时使用大量有机溶剂 气相层析法 利用样品在载送气体及固定相之间分配系数的不同来分离混合物 缺点：设备成本高, 无法气化的样品须先进行衍生化反应，增加其挥发性及稳定性 优点：准确度高、特异性高及敏感度高，并且可在短时间内完成样品分离及检测 实际操作时之各种分析方法之比较 分析方法 优点 缺点 ELISA 只需简单前处理即可进行分析，并可同时分析许多样品，且缩短时间，敏感度高 但因目前所发展的ELISA只能检测一种药物，无法像层析法可同时检验多种药物 TLC 比ELISA程序更简单及快速，设备也简单。同时可分析多个样品及同时检验多种药物，且成本很低 利用Densitometer测量呈色强度，常因作用时间长短影响荧光强度导致误差, 敏感度及特异性都不高, 只能用于快速之初步检验 HPLC 普遍使用，准确度、特异性及敏感度高，且在室温下即可进行分析 只能检验一个样品，检验品多时花费时间长，分析时使用大量有机溶剂 GC 同时可分析多个样品，准确度、特异性及敏感度高，分析时间较HPLC短 无法气化的样品须先进行衍生化反应，增加其挥发性及稳定性 样品之前处理 畜产品中成份复杂，进行分析前须做前处理 自基质中萃取，并做净化、浓缩、稀释及溶解相之改变 理想的前处理须具备：移除干扰物质能力强、良好回收率及再现性佳、容易操作、省时与符合经济成本 药物残留之例行检测流程 薄层分析分析法 免疫吸附分析法 筛选 高效液相层析法 气相层析法 例行药物残留检验工作 先用ELISA或TLC进行初步筛选，待测出阳性或疑阳性，再以高效液相层析法或气相层析确认 ELISA：只需简单前处理即进行分析，并可同时分析许多样品，且缩短时间，敏感度高。但因目前所发展的ELISA只能检测一种药物，无法像薄层层析法可同时检验多种药物 磺胺剂的检测方法 先进行前处理，包括萃取、浓缩及净化 使用SPE实验程序才能减少使用有机溶剂的量，且可同时进行多重样品的处理程序 另, MSPD(matrix solid phase dispersion)可直接将检体与固相吸附材质混合, 再以冲提液将磺胺剂冲提出来 以上两种方法都可达快速, 净化, 浓缩目的 磺胺剂的萃取物分离与检测-1 净化及浓缩后的检品需进一步将萃出物分离及检测，现今用于分离及检测磺胺剂的方法包括TLC、ELISA、HPLC及GC。 磺胺剂的萃取物分离与检测-2 应用酵素免疫分析法检测时，抗体的制备、力价及专一性相当重要，免疫原的特性则能影响抗体的专一性，而免疫原及酵素免疫原结合体与抗体的亲和力高低，对酵素免疫分析法的实用性更具有决定性的影响。应用酵素免疫分析法检测磺胺剂有sulfamethazine、sulfadimethoxine、及sulfadiazine。 磺胺剂的萃取物分离与检测-3 薄层层析法的设备简单，操作容易，亦具有可同时检测多个样品的优点，若每个样品间隔1.5cm