颗粒病毒GV简介—培训课件.pptVIP

颗粒体病毒(GV) 冯建 马俊锋 颗粒体病毒(GV) 颗粒体病毒（granulosis virus，简称GV）在分类上属杆状病毒科B亚组，是有包涵体的昆虫病毒。 目前为止国内外发现GV约130株，中国发现约42株，其中26株为首次发现。 GV的一般形态特征 包涵体称颗粒体(granule) 或荚膜(capsule)。 先在被感染细胞的核内形成，但当核膜破裂后可溢出到细胞质内。 包涵体很小。在电子显微镜下观察，颗粒体的形状有卵形、椭圆形、长卵形等，通常直径为0.1～0.3μm，长0.3～1.0μm。每个包涵体内一般只有一个病毒粒子。有时也出现不正常的形状。 左图：霜天蛾GV的形态 右图：小菜蛾GV经碱处理后的病毒粒子 GV的理化性状 不溶于水和一般的有机溶剂如乙醚、乙醇、丙酮、二甲苯等。 遇强酸或强碱，包涵体能迅速溶解，并可使病毒粒子变性而失去侵染力。 GV的理化性状 可在室温下保存5年以上而不失侵染力。 高温可使其失活。 冰冻无多大危害。较低的温度有可能延长贮存的时期。 紫外线或其他辐射线能使完整的病毒失活。 用稀碱处理后可获得完整和具侵染性的病毒粒子。 GV对昆虫的侵染 感病特征： 感染初期无明显病征 之后出现反应迟钝和停止取食 随后虫体颜色发生改变，血液渐变乳白 感病虫体可能膨大或收缩 已死幼虫体壁脆弱，破后流出大量颗粒体。 染病幼虫可存活较长时间。 病死虫体有时用腹足倒挂枝叶上，呈“Λ”形。 GV的感病特征 染病幼虫常于幼虫期即死，有时也可活至蛹期或成虫期。从染病到死亡所经时间因虫而异。一般4～5天，可长至34天，如粘虫。幼虫龄期、侵染剂量、温度等因素也能影响这段时期的长短。 GV的感染途径 通过口服进入易感虫体，颗粒体在中肠中溶解，游离的病毒粒子通过肠道柱形细胞的微绒毛而侵入，在这些细胞核中增殖，新形成的颗粒体病毒释放于血淋巴中而导致对其他组织的继发感染。 虫体外伤和寄生天敌产卵可引起GV对皮下感染，也可经卵垂直传播。 GV的专化性 颗粒体病毒的专化性较强，交叉感染的情况甚为少见，一般认为颗粒体病毒是包涵体病毒含DNA的各类中专化性最强的一类。 以往尚无颗粒体病毒能在植物或其他动物细胞中增殖的报道。近年我国用小菜蛾细胞系BCIRL-Px2-HNU3复制小菜粉蝶GV和用家蚕细胞系Bm-21E-HNU5复制小菜蛾GV成功。 GV的交叉感染现象 鳞翅目幼虫可合并感染NPV和GV两种病毒。如黄地老虎、菜粉蝶、粘虫等可同时感染颗粒体病毒和NPV。粘虫的六龄幼虫如单感染NPV，死亡率3.4％，单感染颗粒体病毒，死亡率20%，如二种合并感染，则死亡率为80％，死体为NPV病征，体内主要是核型多角体，也有些同时存在颗粒体。 昆虫病毒的生产 病毒为专性寄生病原，至今尚未研究出能在人工培养基上生长，只能在活细胞中增殖。因此，目前国内外应用于害虫防治的昆虫病毒制剂主要是通过活虫体增殖和细胞培养法繁殖。 在昆虫活体中大量增殖昆虫病毒 3种途径： 直接在自然种群中繁殖 从野外采回大量活虫接种繁殖 在室内条件下饲育大量害虫接种繁殖 可采用自然饲料或人工饲料。 在细胞系中大量增殖昆虫病毒 用组织培养增殖的病毒在致病性、专化性及其他特性方面有无变异，尚待进一步研究。同时，因组织培养法要求条件较严格，大量增殖病毒还存在不少问题，目前尚未达到实用阶段。 颗粒体病毒杀虫剂 我国在基础和应用方面研究较详细的颗粒体病毒有菜粉蝶GV，小菜蛾GV，黄地老虎GV，茶小卷叶蛾GV等，其中菜粉蝶GV列入国家“七五”攻关项目进行研究，并完成了中试生产。 颗粒病毒杀虫剂的生产实例菜粉蝶GV杀虫剂的生产 菜粉蝶为世界性重要害虫。其幼虫又名菜青虫，是我国分布最普遍，为害最严重，经常成灾的害虫，幼虫偏嗜十字花科蔬菜，幼虫将叶片咬成孔洞和缺刻，严重发生时可将叶片全部吃光。 菜粉蝶GV的生产工艺 1 人工饲料饲养菜青虫 将菜粉蝶卵于人工模拟产卵卡上孵化后，人工饲料饲养至3龄，大部分用来增殖病毒，小部分继续饲养传代，每代21－28天。 2 感染回收 将饲养的3龄菜青虫防于特制的塑料篮子中饥饿3－4小时，将病毒用电动喷雾器均匀喷在菜叶上，喂食菜青虫。一般经过6－7天后，菜青虫开始感病死亡，及时收集病虫。 菜粉蝶GV的生产工艺 3 颗粒体的提取 经感染的病虫用0.7％NaCl浸泡，投入电动匀浆机。将虫浆加入5－10倍的盐水，电动搅拌机搅拌，用30－80目尼龙过滤3次。滤液2000r/min离心30min，收集沉淀。 5 拌和、分装 将标定含量的病毒原粉中加入展着剂，粘着剂，保护剂等拌和均匀，定量分装。 6 产品质量检验 GV在害虫防治上的应