响应面法和变温培养优化海洋黑曲霉产纤维素酶发酵条件.pdfVIP

第 32 卷第 5 期 化学反应工程与工艺 Vo132 , No 5 2016 年 10 月 Chemical Reaction Engineering and Technology Oct. 2016 文章编号: 1001-7631 (2016) 0ι--0473斗8 晌应面法和变温培养优化海洋黑曲霉产纤维素酶发酵条件 陈作国 1 ，4 ，郑刚 l ，蔡勇 1 ，薛桥、升 2 ，杨志坚3 ，姚善泾 4 1.浙江大学舟山海洋研究中心，浙江舟山 316021 ; 2. 湖北工业大学生物工程学院，湖北武汉 430000; 3. 浙江大学生命科学学院，浙江杭州 310058; 4. 浙江大学化学工程与生物工程学院，浙江杭州 310027 摘要z 选用响应面法和变温培养相结合的方法，优化了一种海洋黑曲霉生产耐盐性纤维素酶的液体发酵条件。 首先通过单因素实验初步确定碳源、氮源、温度、表面活性剂、接种量、装液量以及初始 pH; 随后选择 Plackett-Bunnan (PB) 设计挑选出影响滤纸酶活 (FPA) 的主要成分:款皮和吐温-80 (Tween-80); 再通过 爬坡实验，使款皮和吐温-80 浓度接近最大酶活区域:接着选择响应面分析快速有效地求得该菌株产耐盐性 纤维素酶的最佳培养基配方t 最后进行了变温培养实验确定适宜的稳定期培养温度。得到的优化发酵条件为z 款皮 5.53%(叫，玉米浆0.5%(叫，磷酸二氢饵 0.2%(叫， Tween-80 0.1 97%(叫，初始pH 5.0 ，接种量 8% (mo/) , 装液量40 mL, 180 r/min , 37 oc 培养2d 后继续 28 oc 培养2d。优化后的滤纸酶活为0.566 U/mL， 与未优 化时的酶活 (0.283 U/mL) 相比增加了 94.5%。 关键i司E 海洋黑曲霉纤维素.响应面法优化变温培养 中图分类号: Q93 文献标识码:A 纤维素酶是由外切酶、内切酶和纤维二糖酶等三种酶组成的复合酶，它们通过一种协同作用使纤 维素依次降解成纤维二糖和葡萄糖[1 ，2) 。纤维素酶用途极大[34] ，但普通纤维素酶越来越无法满足工业 生产中的一些抗逆性需求，而在海洋独特的环境中，存在着多种耐受极端条件如耐高温、耐高盐、耐 极端pH 的菌种[7] ，这就为解决工业化生产中存在的高盐度、高温、极端pH 环境而使纤维素酶活性降 低乃至失活等问题提供一条新的思路以及途径。王盼等[8)从黄海泥样中筛选出的海洋细菌所产生的酶 的最适反应温度为 35 .C ， 明显低于普通纤维素酶的最适反应温度，而且其在 10 .C 左右也含有较高 的活性。 Trivedi 等问从海藻中分离出的杆菌所产生的纤维素酶，既能在碱性环境也能在高盐度环境下 保持高活性。综上所述，研究耐极端条件的纤维素酶产生菌有着极大的研究和应用价值。 刘杰凤等(10) 曾用浙江东海海底淤泥中筛选得到一株海洋黑曲霉，它能分泌一种耐盐性纤维素酶， 其在高盐环境下能保持较高的活性，并通过单因素实验简单优化了此菌株的液体发酵条件，阐明了此 纤维素酶的酶学性质及其耐盐性。 Xue 等(11)利用响应面法优化了一种以水葫芦为主要碳源的环保型固 体培养基。何可可等[12， 13)也报道了他们在研究海洋纤维素酶方面的研究进展。为了耐盐性纤维素酶的 工业化放大生产和应用，本实验希望以这株海洋黑曲霉为菌株，在单因素实验的基础上，选用响应 面分析，并与一种新颖的变温培养方法相结合，系统且有效地优化该菌株生产耐盐性纤维素酶的液 体发酵条件，以期为该酶的工业化生产和应用提供必要的实验数据与参数。 收稿日期: 2015-07-08; 修订日期: 2015-10-09。 作者简介:陈作国(1991一)，男，硕士研究生:姚善泾(1957一)，男，教授，通讯联系人。 E-mai1:yaosj@zju.edu.cn。 基金项目:国家自然科学基金项目 ; 浙江省公益技术研究社会发展项目 (2015c33219); 舟山市科技计划项目 (201