第四章基因工程所需的基本条本1.ppt

2、质粒的基本性质 1）质粒的自主复制性 质粒能利用寄主细胞的DNA复制系统进行自主复制。 根据在每个细胞中的分子数（拷贝数）多寡，质粒可分为两大复制类型。 ①严紧型质粒（stringent plasmid）拷贝数少，大约有1-几个拷贝。 ②松弛型质粒（relaxed plasmid）拷贝数多，有10—60份拷贝。 2）质粒的不相容性 任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存在于一个细胞中，这种现象称为质粒的不相容性，不相容性的质粒组成不相容性群。以大肠杆菌的质粒为例： ColE1、pMB1 拥有相似的复制子结构，彼此不相容； pSC101、F、RP4 拥有相似的复制子结构，彼此不相容。 3）质粒的转移性 3、质粒上的标记基因 野生型的质粒DNA上往往携带一个或多个遗传标记基因，这使得寄主生物产生正常生长非必需的附加性状，但是对DNA重组分子的筛选具有重要意义 包括： 物质抗性：抗生素、重金属离子、毒性阴离子、有机物 物质合成：细菌毒素、天然色素、有机碱 组成: 特点: 重组克隆的 “插入失活”筛选方法 常用质粒克隆载体：pUC系列 大肠杆菌中蛋白表达形式 (1)完整目的蛋白 (2)融合蛋白：两个或多个基因的开放阅读框按一定顺序连接在一起表达形成的蛋白。 当蛋白质表达以后，有效的分离纯化或分泌就成为获得目标蛋白的关键因素。通过以