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浅谈芦丁对维生素B2的荧光光谱影响 摘 要：采用荧光光谱法研究抗炎药物芦丁与维生素B2的相互作用。结果显示，芦丁对维生素B2能够产生较强的荧光猝灭作用。通过测VB2 的荧光强度的变化，来探讨芦丁与VB2相互作用情况。关键词：芦丁；维生素B2 ；荧光光谱中图分类号：R913 　　文献标识码：A 　　文章编号：1005-5312（2010）18-0188-02核黄素(Riboflavin)又名维生素B2或乳黄素，化学名称为6,7-二甲基-9-( 1′-D- ribityl )-异咯嗪，其分子式为C17H20N4O6。它是一种水溶性B族维生素，1920年被第一次发现，1935年核黄素的化学结构被鉴定。 　　 核黄素是机体必需微量营养素之一。目前核黄素的生产方法很多，其中微生物发酵法是近年来发展起来的一种经济有效的方法，是国内外工业生产核黄素的发展趋势。芦丁(Rutin)又名芸香甙，维生素P，紫槲皮甙。是从豆科植物槐花中提取的黄酮类化合物。芦丁是临床上广泛使用的具有高效抗炎作用的药物。本文采用荧光光谱法就芦丁对VB2的荧光光谱影响进行了研究，研究了在不同的pH条件下，芦丁对维生素B2的荧光猝灭作用。一、实验部分（一）主要仪器与试剂 　　960型荧光光度计；电子分析天平；移液管；容量瓶维生素B2；芦丁；KH2PO4；Na2B4O7；NaOH；HCl；所用试剂均为分析纯（二）实验内容1.标准溶液的配制 　　芦丁标准溶液：准确称取0.06105g 芦丁(C27H30O16 分析纯）于50ml 烧杯中，加少量的无水乙醇(C2H5OH 分析纯) 溶解，转移至100ml 容量瓶中，加无水乙醇至刻度，试液的浓度为1×10-3 mol/L。再准确移取该试液10ml 于100ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，试液浓度为1 × 10-4 mol/L。核黄素标准溶液：准确称取0.03764 g 核黄素于100ml 烧杯中，加蒸馏水溶解，再全部转移到1000ml 的容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，试液浓度为1 × 10-4 mol/L。 缓冲溶液的配制： 　　 配制pH=6.0 量取0.10mol/L的KH2PO450ml，0.10mol/L 的NaOH5.60ml 于100ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。配制pH=7.0、8.0、9.0量取NaOH29.10ml、NaOH46.7ml、HCl 4.6ml，分别配制，方法同上。2.实验步骤（1）在不同的pH条件下，芦丁对维生素B2的荧光光谱测定准备10个10ml的容量瓶，分别准确移取已配制的核黄素标准溶液0.5ml，pH=6.0的缓冲溶液2ml于10个容量瓶中，然后依次加入不同体积的芦丁标准溶液，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置。然后，在室温，波长为530nm的条件下，测定随着芦丁浓度的变化，维生素B2的荧光强度变化情况。测量三次，取平均值。 　　测定在pH=7.0、8.0、9.0的情况，其步骤同上。二、结果与讨论（一）荧光光谱固定VB2的量，逐渐增加芦丁的浓度，VB2的荧光强度均有规律的降低(峰形及峰位置不变)。说明芦丁与VB2相互产生作用，即荧光猝灭作用，见图1: 　　　 由图1可以看出，在波长为530 nm的条件下，荧光强度最强，测定的灵敏度最高。所以确定此实验在530 nm 条件下进行测定。（二）猝灭机理 　　激发荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子间相互作用，发生能量转移。引起荧光强度降低、消失或荧光强度与浓度不呈线性关系的现象，这一现象称为荧光猝灭。（三）在不同pH下，芦丁的浓度对VB2的荧光光谱影响按1.2.2实验步骤，在波长为530 nm，SENS=2的条件下，测定芦丁与VB2作用的荧光光谱强度变化。实验结果如表1：表1 在不同pH条件下的荧光强度变化（VB2= 0.50 ml，缓冲=2.00 ml）由数据可以得出，在任一pH下的回归方程,见表2：首先，在同一pH下，固定VB2 的量，随着芦丁浓度的变化从0mol/L 变到5×10-5 mol/L，荧光强度逐渐降低甚至消失。在芦丁浓度为0 mol/L时，荧光强度最强。加入干扰物芦丁溶液后，荧光强度逐渐降低，然后随着芦丁浓度不断增大至5 × 10-5 mol/L，荧光强度降低到最低甚至消失。其次，比较一系列pH下的荧光强度变化，在芦丁浓度为0的时候，pH=6.0时所测定的荧光强度最大，在pH=7.0、8.0、9.0情况下，荧光强度依次有规律的降低，碱性条件下，相互作用强度较小。在加入芦丁并增加浓度时，所测定的荧光强度也急剧下降。此降低规律完全符合荧光猝灭作用。（四）缓冲溶液pH 值的影响 根据实验数据绘制光谱图，以pH为横坐标，荧光强度为纵坐标。如图2: 　　 从图可以看出，在芦丁浓度相同时，荧光强度依次降低，其线的斜率逐