人巩膜成纤维细胞体外三维胶原基质培养系统的构建及其生物力学特性.pdfVIP

108. 中华实验眼科杂志 2017 年 2 月第 35 卷第2 期 Chin J Exp Ophthalmol ,February 2017 ,Vo l. 35 ,No. 2 ·实验研究· 人巩膜成纤维细胞体外三维胶原基质培养 系统的构建及其生物力学特性 胡守龙李莉崔冬梅曾骏文 100056 北京，首都医科大学附属北京儿童医院眼科(胡守龙、李莉) ;510060 广州，中山大学 中山眼科中心(崔冬梅、曾骏文) 通信作者:曾骏文，Email: zeng163net@163.net DOI: 10. 3760/cma. j. issn. 2095-0160. 2017. 02. 004 [摘要] 背景 眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的 人巩膜成纤维细胞(HSFs) 培养体系模型有助于进一步探讨 HSFs 在高度近视形成过程中与胶原基质相互作 用的生物学机制。 目的 构建 HSFs 与 I 型胶原的三维培养系统，微观模拟在体巩膜，建立巩膜重塑模型。 方法 采集新鲜供体巩膜组织，采用组织块培养法分离和培养 HSFs ，采用免疫荧光技术检测细胞中波形蛋白 和角蛋白的表达以鉴定细胞;获取 8 周龄 SPF 级雄性 SD 大鼠鼠尾臆制备鼠尾胶原，400 IJ.J胶原加入 50 jL l NaOH(O.1 6 moVL) 溶液中混匀，加入 80 jL l 10 倍培养液，混匀，溶液 pH 值约为 7 0 加入 1 100μl 终浓度 lx10 /ml 细胞悬液混合形成凝胶培养系统，于倒置相差显微镜下观察 HSFs 的增生情况和细胞形态，采用 IPP-5 软件对 三维培养的含细胞胶原收缩面积进行测量以分析三维胶原系统的物理特性;采用生物力学试验机对三维胶 原系统的生物力学特性进行测定。 结果 培养的 HSFs 波形蛋白呈阳性表达，角蛋白表达阴性。未接种培 养细胞的无成纤维细胞 SD 鼠鼠尾胶原凝胶透明，实验期间性状元明显变化，而含 HSFs 的三维胶原凝胶随着 细胞培养时间的延长细胞数量增加，倒置相差显微镜下可观察到数十层成纤维细胞相互交错呈网状排列，培 养后 7 -14 d 凝胶块呈乳白色，凝胶面积保持在正常的 10% 左右，三维培养系统中的 HSFs 接种后 24 h 细胞产 生多向性突起，呈双极形或纺锤形。 HSFs 胶原凝胶复合物的弹性材料蠕变曲线呈非线性(。可 100 s) 部分与 线性(100 - 600 s) 部分，前者是胶原凝胶在短暂应力的作用下本身的弹性变化，后者是胶原凝胶在定力的作 用下随拉伸时间的延长而出现的蠕变变化。 结论 鼠胶原凝胶对培养的 HSFs 有良好的生物相容性，HSFs 胶原凝胶可形成三维复合物，可呈现机械性生物学特性，是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间 相互作用的良好模型，可用于巩膜重塑的模拟研究。 [关键词] 成纤维细胞/细胞学;巩膜;人;胶原; SD 大鼠;生物力学;细胞培养技术/方法;种植 人巩膜成纤维细胞的胶原蛋白基质 Establishment of human scleral fibroblasts-seeded collagen matrix and its mechanical properties Hu 5houlong ,Li Li , Cui Dongmei ,Zeng Junwen Depαrtment 01 Ophthalmology ,Beijing Childrel内 Hospital ， Cαpital Medical University ,Beijing 100056 , Chinα (Hu 5L , Li L) ; Zhongshan Ophthalmic Center , 5tαte Key Lαboratory 01 Ophthalmology , 5un Yat-sen University , Guangzhou 510060 , Chinα (Cui DM ,Zeng JW) Corresponding αuthor: Zeng Junwen , Emαil:zeng