20141028植物酵素对预防雾霾所致大鼠肺损伤的保护作用试验研究报告(初稿).docxVIP

植物酵素对预防雾霾所致大鼠肺损伤的保护作用试验研究报告（2014）样品名称：植物酵素（优吸装）委托单位：湖北富程祥云生物科技有限公司研究单位：湖北省预防医学科学院/湖北省疾病预防控制中心研究负责人：唐晓荞付少华参加人员：瞿晶菁陈利侃万力林澄瑞万力聂威张杏王薇研究开始日期：二O一三年十二月二十七日研究结束日期：二O一四年四月十一日地址：湖北省武汉市高新大道前徐村生物产业园D1区电话：027真：027编：430075E-mail：fshcdc@163.com植物酵素对预防雾霾所致大鼠肺损伤的保护作用试验研究报告1材料和方法1.1受试样品：受试样品为植物酵素（优吸装），样品性状为棕黄色液体，受试样品湖北富程祥云生物科技有限公司提供。1.2 动物品种及来源：SPF级Wistar大鼠上海西普尔－必凯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(鄂)2013-0016，大鼠饲料由湖北省实验动物研究中心提供，实验动物及饲料生产许可证号：SCXK(鄂)2008-0005。饲养于本单位SPF级大鼠实验室。试验动物体重根据需要领取，5只/盒。实验动物质量合格证号：NO.2008001636430。实验室温度20~26，湿度40-70%。1.3大鼠亚急性吸入试验剂量设置与动物分组1.3.1试验动物与剂量设置：试验动物为SPF级SD大鼠100只，雌雄各半，体重180~220g，按体重大小随机分成A、B、C、D、E五组，每组雌雄各10只，受试样品大鼠剂量设置及受试样品给予方式见表1。表1植物酵素（优吸装）大鼠亚急性吸入毒性试验分组及剂量设置组别性别动物数(只)体重范围（g）A组♀10145.1~197.4♂10203.5~231.6B组♀10154.7~185.8♂10204.1~247.7C组♀10148.7~181.7♂10210.0~244.5D组♀10154.4~193.4♂10206.1~235.2E组♀10148.3~184.6♂10187.5~237.2A组：染毒期间，不饮用植物酵素优吸装，连续染毒28天。B组：染毒开始后，前两周不饮用植物酵素优吸装，后两周饮用植物酵素优吸装。C组：染毒开始后，前两周饮用植物酵素优吸装，后两周不饮用植物酵素优吸装。D组：染毒开始后，连续4周饮用植物酵素优吸装。E组：空白对照（不染毒）1.3.2 样品配制：各剂量组大鼠每日自由饮用受试物，空白对照组自由饮用蒸馏水。1.4 雾霾环境模型:1.4.1选取20m3的染毒室一间，打开空气加湿器，将染毒室的湿度稳定在80～90%，温度控制在20℃～25℃。1.4.2吸入染毒前，手持PC－3A型激光粉尘检测仪测定染毒室粉尘PM2.5及PM10的本底浓度，测定三次，取平均值。然后将准确称取的50g剪碎的干枯树均匀的铺放在有隔热板的电炉上，慢慢加热直至产生浓烟，打开电风扇，使粉尘均匀的弥漫在染毒室空间，关闭染毒室密封门，手持PC－3A型激光粉尘检测仪测定染毒室染毒开始后粉尘PM2.5及PM10的初始浓度，测定三次，取平均值。1.4.3染毒结束后，手持PC－3A型激光粉尘检测仪测定染毒室粉尘PM2.5及PM10的终末浓度，测定三次，取平均值。计算染毒室染毒期间PM2.5及PM10平均浓度。1.5 试验方法:1.5.1模拟雾霾环境形成后，立即测定染毒室的粉尘PM2.5及PM10初始浓度以及染毒室的温湿度，测定三次，记录数据，然后将各剂量组大鼠放入到染毒室内，静式染毒2小时，染毒结束后，取出各剂量组大鼠，手持PC－3A型激光粉尘检测仪测定染毒室粉尘PM2.5及PM10的终末浓度，测定三次，记录数据。1.5.2染毒时间为每天1次，每次染毒2小时，连续染毒28天。每天染毒结束后，各剂量组大鼠自由饮水受试物，空白对照组自由饮用蒸馏水。1.5.3染毒期间每天观察各剂量组大鼠临床表现，记录动物中毒症状，如果出现动物死亡，要进行大体解剖，并做病理学检查。1.6 检测指标1.6.1饮水量及体重：每周1次观察和记录饮水量，每周称量动物体重１次，计算总增重。1.6.2血液学检查：试验结束时所有动物采血，作血液学指标测定，检测项目包括：血红蛋白（HGB）、红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)及分类等。1.6.3血液生化检查：试验结束时所有动物麻醉后采血，分离血清，作血液生化指标测定。检测项目包括：丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cre）、血清白蛋白（Alb）、总蛋白（TP）、血糖（Glu）、总胆固醇（CHO）和甘油三酯（TG）。1.6.4脏器重量：试验结束处死所有动物时，分别称量每只动物的体重以及心、肺、肝、肾、脾等主要脏器的重量，计算脏／体比值。1.6.5病理学检查