水产微生物实验— 消毒与灭菌.docVIP

实验三 消毒与灭菌 消毒与灭菌两者的意义有所不同。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言，灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体，芽孢和孢子。消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。 一、加热法 1．干热灭菌 有火焰烧灯灭菌和热空气灭菌两种。火焰烧灼灭菌适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上作短暂烧灼灭菌。涂布平板用的玻棒也可在醮有乙醇后进行灼烧灭菌。通常所说的干热灭菌是在电烤箱内利用高温干燥空气(160℃一170℃)进行灭菌，此法适用于玻璃器皿如吸管和培养皿等的灭菌。培养基、橡胶制品、塑料制品不能用干热灭菌。 2．湿热灭菌 (1)高压蒸气灭菌法：将物品放在密闭的高压蒸气灭菌锅内，0.1MPa，121℃保持15～30min进行灭菌。适用于培养基、工作服、橡皮物品、玻璃器皿等的灭菌。 (2）常压蒸气灭菌法：在不具备高压蒸气灭菌的情况下，常压蒸气灭菌是一种常用的灭菌方法。适用于明胶培养基、牛乳培养基、含糖培养基等。这种方法可用阿诺氏流动蒸气灭菌器或普通蒸笼进行灭菌。由于常压，其温度不超过100℃，仅能使大多数微生物被杀死，而芽孢细菌却不能在短时间内杀死，因此可采用间歇灭菌以杀死芽孢细菌，达到彻底灭菌的目的。 常压间歇灭菌是将灭菌培养基放入灭菌器内，每天加热100℃，30min，连续3d，第一天加热后，其中的营养体被杀死，将培养物取出放室温下18—24h，使其中的芽孢发育成营养体，第二天再加热100℃，30 min，发育的营养体又被杀死，但可能仍留有芽孢，故再重复一次，使彻底灭菌。 (3)煮沸消毒法：注射器和解剖器械等可用煮沸消毒法。一般煮沸消毒时间为10-15 min，可以杀死细菌所有营养细胞和部分芽孢。如延长煮沸时间，并在水中加入l％碳酸氢钠或2%-5%石炭酸，效果更好。 (4)超高温杀菌（UHTS）：是指在温度和时间标准分别为135-150℃和2-8s的条件下对牛乳或其他液态食品（如果汁及果汁饮料、豆乳、茶、酒及矿泉水等）进行处理的一种工艺，其最大优点是既能杀死产品中的微生物，又能较好地保持食品品质与营养价值。基本原理是建立在食品品质及营养成分等不遭受热力破坏的温度与微生物受热死亡的温度两者之间差异很大这一规律之上的。超高温杀菌是自80年代以来已在世界各国广泛应用。适用于橘子汁、猕猴桃汁、荔枝汁、菊花茶、牛乳等生产。 二、过滤除菌 许多材料如血清、抗生素及糖溶液等用加热消毒灭菌方法，均会被热破坏，因此采用过滤除菌的方法。应用最广泛的过滤器有： 1、蔡氏过滤器：该滤器是石棉制成的圆形滤板节和一个特制的金属（银或铝）漏斗组成，分上、下两节，过滤时，用螺旋把石棉板紧紧夹在上、下两节滤器之间，然后将溶液置于滤器中抽滤。每次过滤必须用一张新滤板。根据其孔径大小滤板分为三种型号：K型最大，作一般澄清用；EK滤孔较小，用来除去一般细菌；EK-S滤孔最小，可阻止大病毒通过，使用时可根据需要选用。 2、微孔滤膜过滤器：滤膜用醋酸纤维酯和硝酸纤维酯混合物制成的薄膜。孔径分0.025,0.05,0.10,0.20,0.22,0.30,0.45,0.60,0.65,0.80,1.00,2.00,3.00,5.00,7.00,8.00和10.00μm，但若要将病毒除掉，则需要更小孔的微孔的滤膜。微也滤膜不仅可以用于除菌，还可用来测定液体或气体中的微生物，如水的微生物检查。 三．辐射灭菌 紫外线波长在200-300nm，具有杀菌作用，其中以265-266nm杀菌力最强。此波长的紫外线易被细胞中核酸吸收，造成细胞损伤而杀菌。无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线照射灭菌。此外，采用60Co-γ射线灭菌。也已广泛用于不能进行加热灭菌的纸、塑料薄膜，各种积层材料制作的容器以及医用生物敷料皮等的灭菌。γ射线灭菌的优点是：穿透力强，可在包装完好条件下灭菌。 四、化学药品灭菌 化学药品消毒灭菌法是应用能抑制或杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法，能破坏细菌代谢机能并有致死作用的化药剂为杀菌剂，如重金属离子等，只抑制细菌代谢机能，使细菌不能增殖的化学药剂为抑菌剂，如磺胺类及大多数抗生素等。实验室常用的化学杀菌剂及应用范围和浓度见表1。 表1 实验室中常用的化学杀菌剂 类别 实例 常用浓度 应用范围 醇类 乙醇 70%-75% 皮肤及器械消毒 酸类 乳酸 0.33-1mol/L 空气消毒（喷雾或熏蒸） 食醋 3-5ml/m3 熏蒸消毒空气，可预防流感病毒 碱类 石灰水 1%-3% 地面消毒 酚类 石炭酸 5% 空气消毒（喷雾） 来苏尔 2%-5% 空气消毒、皮肤消毒 醛类 福尔马林 10%溶液2-6ml/m3 接种室、接种箱或厂房熏蒸消毒 重金属离子 升汞 0.1% 植物组织（