水产微生物实验—培养基的配制.docVIP

实验二 培养基的配制 一、基础知识 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。飞自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。 此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。 根据微生物的种类和实验目的不同，培养基的类别如下 （一）按成分的不同分 1．天然培养基。 主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、玉米粉、豆饼粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定。这类培养基是实验室和发酵工厂常用的培养基，例如牛肉膏蛋白胨培养基，马铃薯培养基，玉米粉、黄豆饼粉培养基、血琼脂培养基等。 2．合成培养基 用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，因此也称化学成分明确的培养基(chemically defined medium)，如高氏I号培养基、查氏培养基、M9培养基等。一般用于研究微生物的形态，营养代谢、分类鉴定、菌种选育、遗传分析等。 高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。如果加入适量的抗菌药物(如各种抗生素、酚等)，则可用来分离各种放线菌。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀、如高氏工号培养基中的磷酸盐和镁盐相互混合时易产生沉淀；因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将三种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏工号培养基中的FeS04·7H2O的量只有0.001％，因此在配制培养基时需预先配成高浓度的FeSO4·7H2O贮备液，然后再按需加入一定的量到培养基中。 高氏工号培养基配方如下 可溶性淀粉 20g NaCl 0.5g KNO3 1g K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂 15-25g 水 1000 ml pH 7.4-7.6 3．半合成培养基 在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养基上生长，应用广泛。例如常用的马铃薯葡萄糖培养基，很多霉菌都生长良好。 （二）按培养基的物理状态分 1．固体培养基 在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基。实验用的凝固剂有琼脂、琼脂糖、明胶和硅胶，后者用于配制自养微生物的固体培养基．对其他多数微生物来讲，以琼脂最为合适，一般加入1.5％-2.5％即可凝固成固体。此培养基可供微生物的分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用。 2．半固体体培养基 在液体培养基中加入少量凝固剂即为半固体培养基。例如用琼脂作凝固剂时只需加入0.2％-0.7％。此种培养基常用来观察细菌运动的特征、菌种保存和噬菌体的分离纯化及制备等。 3．液体培养基 不含任何凝固剂，配后成液体状态的培养基。广泛用于微生物的培养，生理代谢和遗传学的研究以及工业发酵等。 （三）按培养基的用途分 1.基础培养基 含有一般细菌生长繁殖需要的基本的营养物质。最常用的基础培养基是天然培养基中的牛肉膏蛋白陈培养基．这种培养基可作为一些特殊培养基的基础成分。 牛肉膏蛋白胨培养基是工种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖． 牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下： 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g