百合鳞茎内源激素的HPLC测定法.pdfVIP

第31卷第6期 南昌大学学报( 科版) Vo1．31 No．6 2007年12月 Journal of Nanchang UniverSity(Natural Science) Dec．2O0r7 文章编号：1006—0464(2007)06—0570—02 百合鳞茎内源激素的HPLC测定法 杨柏云，郭燕华，罗丽萍，高荫榆 (南昌大学生命科学学院，江西 南昌 330031) 摘 要：建立了从百合鳞茎中提取3种植物内源激素的方法，并采用高效液相色谱法测定龙牙百合中的赤霉素 (GA，)、吲哚乙酸(IAA)和脱落酸(ABA)等3种植物激素的含量，结果表明，该方法具有简单快捷，费用低等优点， 适合对色素含量不高样品的快速测定。 关键词：百合；高效液相色谱；植物激素 中图分类号：0657．7 文献标识码：A 植物内源激素的研究是植物生理学研究的重要 膜(天津菲罗f-I)，RE一52型旋转蒸发仪(上海亚 内容之一，植物的内源激素与植物的生长发育的基 荣)。GA，、IAA和ABA标准样品均为Fluka公司的 本规律和代谢过程的调节控制密切相关，内源激素 色谱纯试剂，乙腈和甲醇为色谱级，实验用水为二次 的准确测定对植物生命活动和作物遗传育种栽培领 蒸馏水。 域的研究有重要意义。高效液相色谱是比较理想的 1．3 色谱条件 植物内源激素的分析方法之一，但是在同时测定多 Alhima C18(4．6×250 mm，5 m)反相色谱柱， 种激素困难较大，例如分离度差，峰形不好等现象， 柱温35℃，流动相CH3CN—H O(体积比为30： 因此选择合适的提取方法和色谱条件是准确测定这 70)，0．1％ H3PO 溶液调pH值为3．0，流速：1．0 些物质的关键。国内有关高效液相色谱研究植物激 mL／min。进样量为20 trL，GA 的检测波长是210 素的报道一般多见于水稻和玉米等主要农作物，其 nm，IAA和ABA的检测波长是254 nm。采用峰面 余的小杂粮作物和蔬菜类作物激素研究很少Ll I4 ， 积外标法定量测定。 百合内源激素的HPLC研究还未见报道。本文以龙 1．4 内源激素的提取和纯化 牙百合鳞茎为实验材料，提取其中的赤霉素、吲哚乙 将百合洗净用滤纸吸干，准确称取内部鳞茎 酸、脱落酸，采用HPLC分离测定其含量。 1．000 0 g，切碎后加10 mL纯甲醇在4℃冰箱中放 置24 h；然后在避光条件下将样品冰浴研磨成匀浆， 1 实验部分 分3次加80％甲醇20 mL(10 mL+5 mL+5 mE)， 1．1 供试材料 4℃冷浸提取24 h；5 000 r／min离心30 min，倾出上 龙牙百合鳞茎(Lilium．brownii vaF,viridulum 清液，残渣用少许纯甲醇洗涤3次，合并全部浸提液 Baker)由南昌大学生命科学学院提供。栽培地点为 和洗涤液；提取液于35℃减压浓缩至2 mL左右， 南昌大学生物园内，选择肥沃干燥且排水良好的沙 经0 45 m的超微滤膜过滤，Sep—PakC。8小柱富集 质壤土，深耕细耙，喷施福尔马林后覆盖薄膜熏蒸， 其中的激素，以色谱纯甲醇与0 05 mol·L～，pH 在播种之前再翻地一次。10月中旬播种，种球在下 7 0的磷酸盐缓冲液(40：60，V／V)溶液洗脱后定容 地之前用甲基托布津800倍溶液浸泡30 min后晾 至10 mL进行HPLC