乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白HBSP与肝细胞泛转录表达因子的相互作用.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………… 2 英文摘要……………………………………………………………………… 3 正文 前言……………………………………………………………………… 4 材料和方法……………………………………………………………… 5 结果……………………………………………………………………… 24 讨论……………………………………………………………………… 30 参考文献………………………………………………………………… 33 附录一 英文缩略图标……………………………………………………….. 附录二试剂配方表………………………………………………………….. 附录三主要仪器设备……………………………………………………….. 38 论文综述 泛转录表达因子UXT 与肿瘤发生发展的关系………………………. 39 致谢…………………………………………………………………….… 44 1 万方数据 中文摘要 乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白（hepatitis B spliced protein，HBSP ）是由2447 nt-489 nt 单剪接型2.2 Kb HBV 剪接变异体编码产生的一种蛋白。已有研究显示， 它可诱导肝细胞凋亡，与肝硬化发生呈正相关；HBSP 还可诱导特异性 CTL 活 性，导致肝脏损伤。目前该蛋白的具体致病机制仍未阐明，为了更深入了解其致 病性，本实验室在前期研究工作中，以酵母双杂交筛选的方法获得了多个与 HBSP 相互作用的肝细胞蛋白，泛转录表达因子(Ubiquitously expressed transcript， UXT) 即是其中之一。本研究首先构建 pCMVTNT-UXT 重组载体，利用TNT 兔 网织红细胞裂解物转录/翻译偶联系统体外转录翻译UXT 蛋白，诱导表达和纯化 GST-HBSP 融合蛋白，通过GST pull-down 实验，证实了HBSP 和UXT 在体外 具有直接相互作用。进一步通过哺乳动物细胞双杂交，将 pBIND-HBSP 与 pACT-UXT 重组质粒和报告基因载体pG5luc 共转染肝癌细胞株 Huh7 细胞，结 果证实 HBSP 和 UXT 在哺乳动物细胞存在相互作用。另外，本研究成功包装 表达HBSP 的重组腺病毒，为进一步研究UXT 与HBSP 在肝细胞的相互作用以 及对HBSP 肝细胞功能的影响奠定了基础。 关键词：乙型肝炎病毒，RNA 剪接，泛转录表达因子，蛋白相互作用 2 万方数据 Abstract HBSP (Hepatitis B spliced prote