酶工程第四章资料.ppt

2）分配效应：由于固定化酶载体的亲水性、疏水性及静电作用等引起固定化酶内部底物、其他各种效应物（H+, OH-离子，溶剂）以及产物在微环境和宏观体系之间的不等分配，从而影响酶反应速度的现象。 3）分配效应动力学 简化： ① 假定酶被均匀地固定在载体表面，且整个反应系统充分搅拌，混合均匀，排除扩散效应。 荷电载体与荷电溶质静电作用产生的分配效应常用分配系数表示 分配系数ρ= [Si]/[S] Si：代表底物和其他各种效应物在微环境中的局部浓度 S：代表底物和其他各种效应物在宏观体系中的总体浓度 根据Boltzmann分配定律，荷电溶质在 荷电载体微环境与外部溶液的分配服从分配系数可表示为： [Si]= ρ[S] ?ρ=exp[-ZeΦ/(KBT)] 其中，Ze荷电溶质的电荷，Φ荷电载体产生的静电位，KB为Boltzmann 常数，T 绝对温度 对固定化酶催化反应，分配效应仅影响底物浓度分布，酶的动力学方程仍可用米氏方程表示。 ?V=Vm [Si] /(Km+ [Si]) = Vm [S]ρ/(Km+[S]ρ) = Vm [S]/(Kappm +[S]) ?其中Kappm=Km/ρ 上式表明，分配效应造成的影响是改变Km。 ρ= [Si]/[S] Kappm=Km/ρ （1）当载体与底物电荷相同时， [Si]＜[S]，ρ＜1， Kappm＞ Km （2）当载体与底物电荷相反时， [Si] ＞[S]，ρ＞1， Kappm＜Km （3）上述效应，通过提高反应系统的离子强度，可减弱或消除 （4）采用疏水性载体，如果底物为极性物质或电荷性物质，则[Si] ＜[S]，ρ＜1， Kappm＞ Km 如果底物为疏水性物质，则[Si] ＞[S]，ρ＞1， Kappm＜Km ?ρ=exp[-ZeΦ/(KBT)] 其中，Ze荷电溶质的电荷，Φ荷电载体产生的静电位，KB为Boltzmann 常数，T 绝对温度 分配效应对H+和OH-的影响：H+和OH-在载体内外也呈不等分布。 [Hi+]=?[H+]exp[-eΦ/(KBT)] -log [Hi+] =-log{?[H+]exp[-eΦ/(KBT)]} pHi=pH+0.43 eΦ/(KBT) ΔpH= pHi -pH=0.43 eΦ/(KBT) ln expx=x log expx=-0.429x pHi微环境 pH 宏观环境 阴离子载体： ΔpH0 ΔpH= pHi -pH=0.43 eΦ/(KBT) 阳离子载体：ΔpH0 ΔpH= pHi -pH=0.43 eΦ/(KBT) 3．扩散效应 底物／产物和其他效应物在固定化酶载体内外之间的迁移扩散速度受到某种限制，造成了不等分布，从而影响反应速度。扩散效应与这些物质的分子量大小，载体的结构及酶反应性质有关。 外扩散：底物／产物和其他效应物在宏观体系与酶颗粒表面间的扩散。 内扩散：在多孔性固定化载体内，底物、产物和其他效应物在载体颗粒表面与载体内的酶活性部位间的扩散。 外扩散效应动力学假定 1、惰性载体，不考虑分配效应的影响 2、酶固定于液体不能渗透的固体膜表面上，排除内扩散效应的干扰 反应过程：底物从溶液中移向膜表面，底物被酶催化为产物，产物从膜表面移向溶液中。 酶促反应速度=Vm[Si]/(Km+[Si]) 底物转移速度=Js([S]-[Si]) Js : 底物转移系数 当外扩散传质速率很快，固定化酶外表面反应速率相对较慢，并成为该反应过程速率的控制步骤时，则Si=S,此时反应速率: V=Vm[Si]/(Km+[Si]) =Vm [S]/（Km+[S]） (2) 当外扩散传质速率很慢，固定化酶外表面反应速率相对较快，此时外扩散速率成为反应的控制步骤，则Si=0，此时反应速率为: V= Js([S]-[Si]) =Js[S] 当反应系统处于恒态时，酶促反应速度和底物传递速度相等。 V=Vm [Si]/(Km+[Si]) = Js([S]-[Si]) 当Km 》[Si]时，则： Js([S]-[Si])= Vm [Si]/Km [Si]= Js[S]/ （Vm /Km+ Js） V=Vm [Si]/Km = [S] /（1/Js+ Km / Vm ） 当Js 》 Vm /Km时，则： 1/Js Km / Vm V= [S] /（1/ Vm /Km ）= Vm [S]/Km（酶促反应限速） 当Js 《 Vm /Km时，则： 1/Js Km / Vm V= Js [S] （外扩散限速） Thiele准数（西勒准数 μ） μ= Vm [S]/Km （酶促反应限速） Js [