植物微原生质体的融合.pdfVIP

植物生理学通讯 第43卷第6期，2007年12月 植物微原生质体的融合 吴紫云，华玉伟，黄华孙 中国热带农业科学院橡胶研究所，农业部热带作物栽培生理学重点开放实验室，海南儋州571737 Plant Microprotoplast Fusion WU Zi-Yun，HUAYu-Wei，HUANG Hua．Sun’ KeyLaboratoryofPhysiologyofTropicalCropofMinistryofAgricuhure，RubberResearchInstitute,ChineseAcademyofTropical Agricultural Sciences．Danzhou．Hainan 57 l737 China 提要：文章就植物微原生质体融合技术的基本原理和技术的应用作了介绍和展望。 关键词：体细胞杂交；微核化；微原生质体；微原生质体融合 自从1972年Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏 植物微原生质体融合(microprotoplast fusion) 烟草的体细胞杂种以来，体细胞杂交已在许多植 (又称微细胞杂交、微核技术、微融合技术)是20 物的种内、种间、属间甚至科间成功实现。研 世纪90年代发展起来的一项实现部分基因组转移 究重点由模式植物向重要农作物和经济作物转移， 而又避免染色体损伤的新的不对称融合技术。迄 同时，将体细胞杂交与常规选育程序相结合，在 今，采用微原生质体融合技术已在多种植物中获 农作物和经济植物的育种以及生产中的应用潜力已 得微原生质体融合杂种(Verhoeven等l 99 l； 开始显现(Heath和Earle 1997；Grosser等1998； Ramulu等1993，1994；Rutgers等1997；Matthews McGrath等2002；Hu等2002)。植物体细胞杂交 等1999；Binsfeld等2000；Saito和Nakano 2002a； (plant somatic hybridization)是以原生质体培养为基 Louzada等2002)。本文对植物微原生质体融合技 础，人工诱导不同亲本的原生质体融合，并通过 术的基本原理以及这项技术的应用作介绍和展望。 异核体的培养产生体细胞杂种的技术，包括对称 1植物微原生质体融合技术的原理 融合(symmetric protoplast fusion)和非对称融合 微原生质体融合技术最先是在人和其他哺乳 (asymmetric protoplast fusion)。前者是将供体植 动物的研究中进行的，植物微原生质体融合是在 物原生质体的整个基因组转移到受体中，这不仅 此基础上发展起来的将一种植物的一条或几条染色 将目的基因转移到受体中，同时也将不利基因转 体转移到另一种植物中的新的非对称原生质体融合 移到受体中，而且由于基因组不协调导致营养和 的方法。其原理是采用适当浓度的微核诱导剂， 生殖生长发生异常(Liu等2005)。后者是将供体植 包含DNA合成抑制剂和纺锤体毒素两大类，常用 物的原生质体的部分基因组转移到受体原生质体。 的如秋水仙素(C0lChiCine，C0L)、安磺灵 在融合前，往往先对一方亲本的原生质体进行射 (oryzalin)、草胺磷除草剂(cremart)、甲基氨草磷 线辐射、药物预处理，钝化细胞核，然后再和 (amiP roPhO S—methYl，APM)、甲氨喋呤 另一亲本的原生质体融合。由于辐射等处理会造 (methotrexate，MTX)、氯苯胺灵(chlorpropham， 成一方亲本部分核物质或全部核物质的丢失，非 CIPC)等。这些药剂可使正在分裂的植物细胞停 对称融合在转移部分核物质或只保留一方亲本的核 留在有丝分裂中期，数小时后，染色体解开螺 物质形成非对称杂种或胞质杂种方面有其独特之 旋，形成内含多个微原生质体的微核化