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植物生理学通讯 第43卷第6期，2007年l2月 1139 黑桫椤孢子的无菌栽培 张银丽I ，李杨 ，一，季梦成 ，李东 ，石雷 ， 浙江林学院园林学院，浙江临安311300： 中国科学院植物研究所，北京100093； 中国科学院研究生院，北京100039 Spore Sterile Culture in Alsophila podophyUa Hook． ZHANG Yin—Li ，LI Yang ，JI Meng—Cheng ，LI Dong ，SHI Lei ，’ Landscape Architecture School Zhefiang Forestry University,Lin’an，Zhefiang 311300,China； Institute ofBotany,Chinese AcademyofSciences，Beijing100093,China；’GraduateUniversityofChineseAcademyofSciences,Bezjing100039,China 1植物名称 黑桫椤 lsophila podophylla Hook．)。 萌发率高10％左右。各培养基对配子体发育的影 2材料类别 成熟的孢子。 响不同。形成配子体时间：1／10MS为33 d，1／ 3培养条件 培养基：(1)MS；(2)1／2MS；(3) 5MS为31 d，1／2MS为28 d， MS为30 d。说 I／5MS；(4)1／10MS(1／2MS、1／5MS、1／10MS 明较高无机盐浓度的培养基更适合于配子体发育， 指大量和微量元素分别为MS基本培养基全量的l／ 在培养基(1)、(2)中，配子体颜色浓绿，生长迅 2、1／5、1／10)。上述培养基均使用MS培养基 速，80 d左右形成成熟的原叶体(图i．d)。而培 全量的铁盐和有机成分，及附加琼脂0．7％，pH 养基(4)中配子体呈黄绿色，生长缓慢甚至停滞。 5．8。培养室温度为(25+2)℃，光照强度30～40 这可能是由于无机盐浓度低，不能满足配子体的 lxmo1．m-2．S (光源为荧光灯)，光照时间12 h．d～。 生长发育需要，或者是较高的萌发率造成个体之 4生长与分化情况 间的竞争，影响配子体的发育。 4．1孢子的灭菌 取5 mg成熟孢子置于10mL离心 4．3孢子体的形成 待配子体布满培养皿时，将配 管中，加入3 mL无菌水，充分振荡使成为悬浊 子体分为1 cm的小丛，转接到有相同培养基的 液，7 g离心1 min，弃去上清液；加入3 mL的 三角瓶中继续生长，并经常滴加无菌水促进受 5％NaOC1溶液，灭菌5 min，然后用无菌水冲 精，提高孢子体形成率。在培养基(1)、(2)中， 洗4～5次，最后加入3 mL无菌水，充分振荡得 接种后120 d左右有孢子体形成(图1．e)。 到无菌孢子悬浊液。 4．4孢子体的移栽 待孢子体长到约5 cm高时， 4．2孢子的接种及配子体发育 用滴管将无菌孢子 将三角瓶放在自然光照下炼苗7 d，再打开瓶盖炼 悬浊液分别接种到培养基(1)^4)上，自接种2 d后 苗7 d后，用镊子轻轻夹出小苗，洗净培养基， 定期观察孢子萌发及配子体发育过程，直至形成 移栽到经高压灭菌的混合土中(草炭土：素沙=1：1)， 幼孢子体，用TS20／30体视显微镜观察孢子的生 保持适宜的空气湿度和温度，移栽成活率可达 长发育情况，并用Nikon ECLIPSE E600照相。 70％以上。 以孢子壁破裂，具有含一个叶绿素的绿色细胞和 5意义与进展 全世界有500多种桫椤科植物，我 一 条不含叶绿素的假根时，定为孢子萌发(图1一 国目前已知的有14种和2变种(夏群1989)。长期 a)。记录萌发时间和各个处理下的孢子萌发率， 以来由于孢子萌发和配子体发育对环境要求严格， 以及配子体大量出现时间和孢子体出现时间。镜 生态环境