哈维氏弧菌FlaA基因的克隆、序列分析及真核表达质粒的构建.pdfVIP

第29卷 第6期 海 洋 学 报 Vo1．29．No．6 2007年 11月 ACTA OCEANOLOGICA SINICA November 2007 哈维氏弧菌FlaA基因的克隆、序列分析及真核表 达质粒的构建 庄 轩 ，覃映雪 ，苏永全 ，王 军¨，丁少雄 (1．厦门大学 海洋与环境学院，福建 厦门 361005) 摘要：哈维氏弧菌是水产病害中常见的致病菌．参照基因库上登录的弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因序 列设计简并引物，PCR扩增哈维氏弧菌TS一628株的FfnA全基因，并克隆到pMD 18一T载体中测 序，经序列分析该基因全长1 140 bp，编码379个氨基酸．与基因库中其他弧菌的同源基因序列比较 显示，哈氏弧菌FlaA基因与霍乱弧菌FlaA基因的同源性最高(79．5 )，该基因编码的多肽缺乏半 胱氨酸，并在N一，C一两端的氨基酸序列较为保守，中间区域的变异较大．对该蛋白的氨基酸组成及 空间结构进行了分析和预测，并推测该蛋白质的平均分子量为40．6 kDa．在该基因末端加上一段编 码Flag短肽的核苷酸序列后克隆到真核表达载体pcDNA3．1(+)，获得带哈氏弧菌鞭毛丝蛋白FlaA 基因的真核表达重组质粒pcDNA—FfnA—tag，为其DNA疫苗的进一步研究奠定了基础． 关键词：哈维氏弧菌；FlaA基因；基因克隆；序列分析；真核表达重组质粒 中图分类号：$94，Q74 文献标识码：A 文童编号：0253—0493(2007)06—0074～06 从病原体疫苗、亚单位疫苗发展到DNA疫苗的研 1 引言 制阶段．DNA疫苗是将含有编码保护性抗原基因 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼类养殖 的真核表达质粒直接接种到宿主体内，被体细胞摄 业中常见的一种条件致病菌，在某些特定条件如水 取并表达相应抗原蛋白，以刺激机体产生相对应的 质恶化或异常环境等情况下，能引起养殖鱼类的溃 免疫应答，从而达到免疫防治的目的[5]．与传统疫 疡性疾病n]，给水产业造成巨大损失 ．但目前生产 苗相比，DNA疫苗具有制作相对简单，成本低廉，运 上往往仅依靠大量使用抗生素暂时缓解病害的肆 输保存容易，免疫反应时间长，不存在毒力返强的现 虐，然而滥用抗生素的直接后果一方面导致耐药性 象，并可组构多价疫苗等优点[6]．鱼类DNA疫苗的 菌株不断出现[2]，使得病害更加难以控制；另一方面 研究工作虽然起步较晚，但也已经取得重要进展，主 药物残留极大影响了水产品的质量． 要在鲑鳟鱼类的传染性造血器官坏死病毒(IHNv) 免疫防治既无污染环境之忧，又无药物残留带 和病毒性出血败血症病毒(VHSV)开展了比较深入 来的不良后果，是解决水产业病害的首选方案之 的研究 ]．而有关海洋弧菌的鱼用DNA疫苗研究， 一 ． 鱼类已有较为完善特异性免疫系统，在抗原的 目前除本实验室曾在副溶血弧菌( ．parahaemo— 刺激下能产生IgM类免疫球蛋白[3]，而且鱼类对疫 lyticus)FlaB、FlaI基因的克隆和表达方面做过一 苗抗原的应答时间长 ]，因此．开发鱼用疫苗在鱼病 些尝试性工作外L8 ]，国内均鲜有报道． 防治上具有相当强的优越性．近年来，鱼用疫苗已 弧菌通常具有三类抗原：表面抗原(K抗原)、 收稿日期：2006—05—10；修订日期：2006—10-23． 基金项目：国家863项目(2003AA603011)；和福建省重大科技项目