视网膜新生血管动物模型的制作及血管内皮生长因子的表达.pdfVIP

中文摘要 视网膜新生血管动物模型的制作及血管内皮生长因子的表达 2001级硕士研究生 杨 柳 导 师 盂瑞华 副 导 师 张文一 【摘要】 目的视网膜新生血管性疾病，如糖尿病视网膜病变，视网膜静脉阻塞， 早产儿视网膜病变等治疗不及时都会导致视力下降，甚至视力丧失，病因复杂，发 病机制尚未完全阐明，因此，建立合适的视网膜新生血管动物模型已成为探讨视网 膜新生血管的发生机制并评估其药物治疗效果的重要手段。本研究采用高浓度氧诱 导方法建立小鼠的视网膜新生血管动物模型并观察新生血管的发生、退化及血管内 皮生长因子(vEGF)的表达，并对其研究方法及结果进行评价。方法选择鼠龄 只。正常对照组幼鼠在正常环境温度下饲养：高氧组幼鼠放置于75％氧浓度的密闭 容器中饲养5d，随后移置正常环境温度中饲养，并用测氧仪全程监测容器内的氧分 压。每日打开氧箱更换垫料、加食、替换母鼠一次。日光照明。环境温度控制在 23。C12。C。动物模型制作完成后，分别处死动物，行视网膜铺片，眼球标本石蜡包 埋，视网膜切片HE染色。观察并计数突破内界膜的血管内皮细胞核数目及Ⅷ因子抗 体、VEGF免疫组化染色结果。结果持续高浓度氧使幼鼠视网膜血管收缩、闭塞， 灌注降低，相对低氧使视网膜血管扩张、增生。1．视网膜切片HE染色法行新生血管 内皮细胞核计数可见正常对照组仅在少数切片中见到突破内界膜的血管内皮细胞 膜的血管内皮细胞核，每张切片突破内界膜的血管内皮细胞核个数平均为49．00± 5．682。非配对t检验比较正常对照组与高氧组突破视网膜内界膜的新生血管内皮细 子抗体免疫组化染色来识别血管肉皮细胞，实验结果显示视网膜内界膜玻璃体面新 生血管内皮细胞胞质中见棕黄色颗粒，呈阳性反应，表明这些细胞是内皮细胞，证 实它们为血管源性。3．VEGF免疫组织化学染色：正常对照组未见明显阳性表达；高 阴性反应。结论 1．该动物模型可重复性强，制作周期短，价格低廉，是研究视网 膜新生血管发生机制及药物1_预的合适模型。2．HE染色可很好地显示视网膜内界膜 及突破内界膜的血管内皮细胞核，计数工作简便易行。3．视网膜铺片容易观察视网 膜皿管发育及新生血管的形态，可商接反映视网膜ifII管变化的形态及分布，对比起 来更加简单直观。4．血管内皮细胞特异性Ⅷ因子抗体免疫组化染色来识别血管内皮 中文摘要 细胞，实验结果证明位于视网膜内界膜玻璃体面的这些细胞确实为视网膜新生血管 而22d后为阴性：正常对照组无明显阳性反应。 【关键词】视网膜新生血管动物模型 氧 血管内皮生长因子 英文摘要 AnimaIModeIofOxygen—induced Ret and i onofVEGF nopathyExpress iu Postgraduateyangl Tutor Professor ruihua meng Professor Accessory—tutor zhangwenyi [Abstract】 Neovascularizationsuchas Objective retinopathy diabetic veinocclusionand retinopathy，retinal