甲苯胺蓝荧光猝灭法测定核酸.pdfVIP

第26卷，第1期 光谱学与光谱分析 20O 6年1月 arld AnalysiS Spectr(Is∞py帆tral January，2006 甲苯胺蓝荧光猝灭法测定核酸 郭良洽，叶芳贵，林旭聪，谢增鸿。 福州大学化学化工学院化学系，福建福州350002 摘要以甲苯胺蓝为荧光探针，基于聊蛆对甲苯胺蓝的荧光猝灭作用，建立了一种定量测定DT她的新 方法。在pH8．5的¨S-HCl缓冲溶液中，测定小牛胸腺DI姐的线性范围为0．1～6．0腭·mL～，检测限为 27ng·mL～。该方法应用于实际样品樟树嫩叶中的肼町A含量的测定，获得了满意结果。 主题词核酸；甲苯胺蓝；荧光探针 中图分类号：0657．3文献标识码：A 文章编号：1000一0593(2006)01—0121．04 引 言 分光光度计(北京瑞利分析仪器有限公司)，旋涡混合器QL 901(江苏海门市麒麟医用仪器厂)。 核酸作为重要的遗传物质，其研究内容是化学、生物等 诸多学科中最为活跃的领域之一，而核酸的定量测定是研究 ⅡlL-1使用液；樟树嫩叶阱姨浓缩液，由福建师范大学生物 核酸的基础。测定核酸的方法主要是紫外一可见分光光度法、 工程中心提供；甲苯胺蓝(TB)(AR，上海化学试剂公司)，配 荧光法、共振散射法等。荧光光谱法具有选择性好和灵敏度 8．5)， 高的优点，日益成为研究核酸等生物大分子的重要手段。但 由0．1 md·L-1 mol·L-1％s溶液与0．1HCl溶液按一定比 是由于核酸自身的荧光很弱，利用内源荧光无法进行定量测 例混合。其他试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。 定或结构分析，这就需要引入一种荧光分子或离子，即利用 1．2实验方法 外源荧光获得有用的信息。溴乙锭方法的提出受到人们的关 移取1．0×10。Hlol·L_1的甲苯胺蓝溶液1．0 mL，pH 注，但是由于溴乙锭的致癌性，使它们的进一步应用受到了 8．5的％s-HCl缓冲溶液1．0 很大的限制，人们开始寻找新的探针。迄今为止，人们常用 ctDNA溶液于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。在 于核酸研究的荧光探针主要包括有机染料n。]、金属离 适当的测量参数下，在荧光分光光度计和分光光度计进行测 子H’5|、金属离子配合物【6‘9J、能量转移体系n…、半导体纳米定。 粒子[111等。 甲苯胺蓝属于吩噻嗪类染料，已用于共振散射法n21和 2结果与计论 分光光度法¨纠测定聊蛆，而用甲苯胺蓝为荧光探针来测定 核酸未见报道。本文研究了甲苯胺蓝(TB)与核酸相互作用2．1光谱研究 8．5 的荧光体系，在pH THS-HCl缓冲溶液中，体系的荧光随 图1为在确s-HCl缓冲溶液(pH8．5)中不同浓度的 着核酸的加入而被猝灭，其猝灭的程度与DNA的浓度在一 c∞NA存在时体系的荧光光谱图。在ns-HCl缓冲溶液中， 定范围内有良好的线性关系。据此，建立了一种操作简单、 荧光染料TB的最大激发波长为624m，最大发射波长为 灵敏度高，干扰少的测定核酸的荧光分析体系。已用于实际 658 样品樟树嫩叶中的DNA含量的测定，结果满意。 明显降低，且最大激发波长和最大发射波长的位置没有发生 改变。图2为不同浓度的c正lNA存在时体系的吸收光谱图。 1实验部分