骨髓间充质干细胞诱导分化为视网膜细胞研究.docVIP

骨髓间充质干细胞诱导分化为视网膜细胞研究[摘要]近年来干细胞移植治疗视网膜损伤的研究进展迅速，不断取得令人鼓舞的成果。干细胞的来源多种多样。既有眼源性的，如Müller细胞、睫状体细胞等；也有非眼源的，如胚胎干细胞、脑源性干细胞和骨髓间充质干细胞等。该文就骨髓间充质干细胞及其他干细胞如何诱导分化为视网膜细胞的研究进展做一综述 [关键词] 干细胞 视网膜细胞 分化 视网膜是人体接受外来信息的重要部位。外伤、退行性病变及肿瘤等导致的视网膜损伤常引起严重的视力障碍甚至失明。目前随着干细胞生物学的深入研究，应用不同来源的干细胞及其前体细胞参与视网膜组织修复和细胞再生成为研究的热点 1 眼源性干细胞分化修复视网膜损伤 1.1 来源于睫状边缘生长区和睫状体的干细胞 睫状体边缘生长区（ciliary marginal growth zone，CMZ）位于视网膜的边缘。视网膜大部分由CMZ产生的视网膜神经元组成，哺乳动物视网膜生成一旦完成，就不再继续生成。此外也没有发现类似CMZ。最近，Abdouh等[ 1 ]在成年鼠眼内注入生长因子，发现睫状体上皮细胞能重新获得胚胎期特征, 并能表达神经前体标记物nestin及视网膜祖细胞的同源转录因子Pax6和Chx10。这一结果提示成年哺乳动物的睫状体可能是潜在的视网膜前体细胞来源，只是正常情况下这些具有干细胞特性的细胞处于静止状态，睫状体内微环境不允许细胞的迁移和神经发生 1.2 Müller细胞 Müller细胞为一种特殊的神经胶质细胞，在视网膜的发育和功能活动中起重要作用。最近Peter和Patrick等[ 2, 3 ]分别应用出生后的鸡及鱼为对象，研究视网膜神经毒性物质NMDA损伤后视网膜内神经元的再生情况。结果显示：Müller细胞在视网膜受到急性损伤后可重新进入细胞循环，且增殖的Müller细胞具有向损伤区外围扩展的特性。说明在未损伤视网膜内同样可能发生神经再生。Müller细胞可以为视网膜再生提供来源。许多研究还发现在视网膜急性损伤后，许多Müller细胞不仅经历增殖反应，还失去其Müller细胞的形态，并开始短暂表达原仅表达于胚胎前体细胞中的转录因子， 如Pax6、Chx10、甚至Six3[ 3-5] 。这说明增殖的Müller细胞可分化表达视网膜祖细胞 1.3 虹膜色素上皮细胞（iris pigment epithelium,IPE） 由于IPE细胞与视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium, RPE）的胚胎来源相似容易得到。且体外培养的IPE细胞又具有RPE细胞的某些功能，如吞噬感光细胞的外节膜盘，维持视网膜的代谢等。 所以可以将IPE细胞移植于视网膜下代替RPE细胞。动物实验显示将自体IPE细胞移植于视网膜下1～3个月，IPE 细胞形成单层或多层排列，移植区感光细胞保持良好；6个月时IPE细胞与RPE细胞形成连接，RPE细胞顶端色素颗粒增多，感光细胞外节变长，IPE 细胞与感光细胞外节接触，视网膜增厚，荧光素造影时没有发现渗漏[6]。近年来，许多临床工作者将IPE进行自体移植治疗视网膜变性疾病都取得了良好的临床效果[ 7] 2 非眼源性干细胞与视网膜修复再生 2.1 脑源性神经干细胞 Dong等[ 8]从人胚胎大脑皮层分离获得神经干细胞，在体外用转化生长因子β3处理后再移植到鼠玻璃体腔内。结果发现这些细胞移行并与宿主视网膜整合，分化成视网膜细胞且有视蛋白阳性表达。这不仅表明人类神经干细胞能移行整合到宿主视网膜，而且更为重要的是这些细胞经过处理后能够分化成视网膜细胞，特别是类感光细胞。 Nishida等将海马来源的干细胞注入到机械刮伤视网膜的成年鼠玻璃体腔内，结果发现移植的海马干细胞整合到宿主视网膜内，免疫组化显示多数细胞能表达nestin，并表现出对微管相关蛋白2ab、MAP5及胶质纤维酸性蛋白的免疫活性，证明了移植干细胞向神经元和星形胶质细胞分化 2.2 胚胎干细胞( human embryonic stem, hES) 胚胎干细胞具有发育全能性，理论上可以分化出任何细胞类型。Haruta等将鼠胚胎干细胞在体外诱导分化为色素上皮细胞，并移植到4周龄的遗传性视网膜病变RCS鼠的视网膜下间隙。结果发现这些细胞具有正常视网膜色素上皮细胞的形态和生理特性。Meyer等将胚胎干细胞源的神经祖细胞注射到成年的遗传性视网膜退变小鼠玻璃体腔，16周后发现移植细胞与宿主视网膜整合，具有与视网膜神经元类似的形态结构和分布特征，并表达特异性蛋白。Meyer等还发现宿主视网膜神经元，特别是感光细胞的存活明显增加。最近，有学者将人胚胎干细胞进行体外培养，发现在合适的培养条件下大部分hES能够定向成为