蛋白激酶B短发夹环RNA表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞增殖活性的影响.pdfVIP

CN 43—1262／R中国动脉硬化杂志2007年第15卷第l0期 72l [文章编号]1007．3949(2007)15．10-0721．04 ·实验研究· 蛋白激酶B短发夹环RNA表达载体的构建及其 对血管平滑肌细胞增殖活性的影响 于维东 ，胡新华 ，范红杰 ，杨 军 ，张 强 (中国医科大学附属第一医院1．干诊三病房；2．外科，辽宁省沈阳市110001； 3．中国医科大学附属盛京医院神经内科，辽宁省沈阳市110003) [关键词] 病理学与病理生理学； 血管平滑肌细胞； 增殖活性； 蛋白激酶B；表达载体； 短发夹环RNA； RNA干扰 [摘 要] 目的 构建靶向蛋白激酶B基因的短发夹环RNA表达载体，观察其对血管平滑肌细胞增殖活性的影 响。方法 设计多个针对大鼠蛋白激酶B基因的短发夹环RNA序列，化学合成方法合成并经pGEM-T载体克隆后 双酶切，将eDNA序列插入逆转录病毒载体pLXIN，包装后获得蛋白激酶B的逆转录表达载体，感染血管平滑肌细 胞，Northem blot和Weatem blot法检测蛋白激酶B及其下游底物的表达变化。流式细胞仪检测细胞周期变化，MTr法 检测血管平滑肌细胞增殖活性的改变。结果 成功构建蛋白激酶B基因的逆转录病毒载体并包装，感染血管平滑 肌细胞，证实其能显著抑制蛋白激酶B的mRNA和蛋白产物表达，下游的pT0~6k表达相应减少；被感染血管平滑肌 细胞的分裂、增殖过程受阻，更多细胞停滞在G0，c，期。结论 成功构建蛋白激酶B基因逆转录病毒RNA干扰表 达载体，感染血管平滑肌细胞能够明显抑制其分裂、分化和增殖。 ． [中图分类号] R363 [文献标识码] A Construction of Short Hairpin RNA Vector Targeting PKB／Akt and Its Effect on the Pro- liferation of Vascular Smooth Muscle CeU YU Wei-Dong。HU Xin-Him。FAN Hong-Jie。YANG Jun。and ZHANG Qiang (D ofNeurology。the First Affa~ Z ofChina Medical Univers／ty。Shen)m~r 110001·嘶 m) [KEY w0jRDS】 Vascular Smooth Muscle ceU： Proliferation Activity； PKB／Akt； Expression Vector； shRNA； RNA Interference 【 BS CT] Aim To construct short hairpin RNA(sldlNA)retroviral vector ofPKB／Akt and study the effect on the pro— liferation of vascular smooth muscle cell【VSMC)． Methods 1k 8L~cluence of shRNA of PKB／Akt was constructed by the software and synthesized by chemical method and then was cloned into oGEM-T vector。which Was certified by DNA sequencing． rI1le sequence Was inserted into a retroviral vector pLXIN。then the vector Was paek~,ed in PI cells．Tire efficiency ofinhibi- tion Was