重组猪尿酸氧化酶在血浆尿酸浓度测定中的应用.pdfVIP

塞旦堕堂鍪查!!!!生筮垫鲞箜!!塑 重组猪尿酸氧化酶在血浆尿酸浓度测定中的应用 匡红艳 荣俊姜孝芳蔡联粜 摘要 目的：探讨纯化重组猪尿酸氧化酶在人血浆尿酸检测中应用的可行性。方法：尿酸测定方法为 酶比色法。每个测定样品做3个平行管．取平均值计算测定结果。比较自制血尿酸检测试剂与商品试剂的准 确性、回收率、批间差、批内差和线性误差等主要性能指标。用自制试剂测定医院血浆样品，将测定结果与 医院测定结果进行比较。结果：自制试剂与商品试剂的主要性能指标接近．自制试剂测定的血浆尿酸值与商 品试剂测定值高度相关(Rz=0．9741)。结论：重组猪尿酸氧化酶可用于酶比色法检测血浆尿酸含量。 关键词尿酸； 重组猪尿酸氧化酶： 测定 血液中尿酸含量是诊断和观察痛风病的一项 1．2重组猪尿酸氧化酶的制备及理化性质重组 灵敏指标．也可作为急性脑血管病、心脏疾病、妊 猪尿酸氧化酶由本实验室纯化、制备并保存。经 娠高血压症、糖尿病、各种肝肾疾病及血液病等病 SDS．PAGE电泳检测为纯酶制剂，纯度在95％以 情观察的一项重要参考指标：1-3]。因此尿酸含量的上。前期实验室酶生化研究(8]结果表明，在最适反 检测和分析在临床疾病诊断与治疗研究方面具有 应温度、最适反应pH、温度稳定性等方面，该酶同 8．4，温度 重要意义。测定尿酸的常用方法有：酶法、伏安法、 其他来源的尿酸氧化酶比较接近，在pH 毛细管电泳法、高效液相色谱法和同位素稀释质 为37℃条件下的Km值为8．03Ixmol／L。此Km值 谱法等。其中依赖于尿酸氧化酶催化反应的酶法 明显低于真菌、细菌、植物中得到的和目前市售的 检测特异性高、反应灵敏、快速简单，临床检验以酶 各种商品尿酸氧化酶，表明该重组猪尿酸氧化酶 法为主[4]。检测尿酸试剂盒中关键的试剂酶是尿酸 与尿酸底物的亲和性较好，抗血清黄嘌呤干扰能 氧化酶[5]，目前市场上的尿酸氧化酶多来自微生物 力更强．更适合于临床诊断和治疗应用。 且依赖进El[6]．导致市场上用于尿酸检测的商品诊1．3 重组猪尿酸氧化酶活性测定 酶活性测定 断试剂盒少且价格较高。本实验室研制的重组猪 及活力单位的定义，参照Koyama等[9]的方法，在 尿酸氧化酶．在实验动物体内能快速降低血尿酸 25℃条件下．取尿酸底物溶液3mL置于1cm光径 8．4，0．2mol／L硼 水平[7]。本研究将用重组猪尿酸氧化酶制剂与商品 的石英比色杯中．该底物液为pH 酸缓冲液中溶解有120 试剂盒进行血浆尿酸浓度测定的对比，旨在了解重 ixmol／L尿酸的溶液，加入 组猪尿酸氧化酶在临床诊断上应用的可行性。 适量纯化重组猪尿酸氧化酶制剂，充分混匀后准 1材料与方法 确反应5 1．1主要试剂与设备尿酸、过氧化物酶(POD)为紫外分光光度计中，在293nm处测定光密度值， 以0。2 mol／L硼酸缓冲液做空白对照。活力单位定 Sigma公司产品，4一氨基安替吡啉(4一TAB)、N．乙基N 义为：该条件下每分钟催化1 (2一羟基一3—磺丙基)一3一甲基苯胺、钠盐(TOOS)、碳酸 Ixmol尿酸生成尿囊 锂等其他试剂为国产分析纯试剂。尿酸试剂盒为北京 素所需要的酶量为1．0个单位(Iu)。 BS 中生北控生物科