糖化蛋白质的电化学检测及其临床应用论文.pdfVIP

第25卷增刊 分析测试学报 VoL25 FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumental Nov．2006 2006年11月 Analysis) 糖化蛋白质的电化学检测及其临床应用 刘松琴 (东南大学化学化工学院，江苏南京210096) 糖化血红蛋白(HbAlc)是血液中葡萄糖分子与血红蛋白分子的口一链末端氨基发生非酶反应的 产物¨以J。血液中葡萄糖的浓度越大，红血球中HbAlc的含量就越高，因此红血球中HbAlc含量高 C 低反映了血液中葡萄糖的水平。由于人体内红血球的寿命大约为100—120d，因此临床上测定HbAl 含量可提前2—3个月预知体内葡萄糖水平，对糖尿病患者血糖水平的中长期控制及糖尿病的早期诊断 具有重要的实践意义．4 HbAlC含量的参考值为5％一20％，并认为4％一6％是正常的。目前临床上有多种方法用来测定 HbAlc含量，比如免疫、离子交换色谱、硼亲和色谱以及电泳等”qJ。这些方法在光度定量测定 分离以及基于HbAlc与Hb结构差别的免疫和硼亲和色谱方法。 用于临床诊断的电化学方法具有选择性好、价格低廉以及电化学仪器所具有的易于微型化，自动 在碳二亚胺活化的醋酸纤维素膜上用来捕捉溶液中的血红蛋白分子，然后利用葡萄糖氧化酶标记的 其安培响应的线性范围为0—25％。但这一方法在测定过程中必须对血红蛋白进行必要的预处理以便 糖化分子的糖化点更利于识别抗体。本文利用二氧化锆纳米粒子能保持固定化蛋白质活性的特点，将 血红蛋白分子固定在热解石墨电极表面，利用硼酸二茂铁与糖化分子之间的特定相互作用测定衍生在 电极表面的二茂铁分子的电化学响应从而发展了一种新型糖化血红蛋白安培传感器，在6．8％一14％ 的范围内具有线性响应。 1 实验部分 剂公司提供，具有不同HbAlC含量的血红蛋白样品由不同比率的6．8％和1096标准溶液混合而成，其 血红蛋白总浓度由541nm和576 cm一)并将总浓度控制在20 等体积混合后置于已抛光好的热解石墨电极表面，真空干燥后用二次水仔细冲洗并超声清洗5min即 得Hb／ZrO：／DDAB／PG电极。该电极在磷酸盐缓冲溶液中的循环伏安图具有一对对称的氧化一还原峰， 化学响应是由于血红蛋白分子中的电活性中心在电极上的氧化还原，说明Hb被成功地固定在电极表 面并有效保持其电化学活性。 2结果与讨论 min，超声洗净后其循环伏安图与 将Hb／zm：／DDAB／PG电极在硼酸二茂铁(FcBA)溶液中浸泡30 浸泡前相比在0．213和0．386V处出现一对额外的氧化一还原峰(图1)，说明固定化糖化血红蛋白分子 V。该 能与FcBA分子作用，使FcBA分子到达电极表面并展现一对氧化一还原峰，其式量电位为0．299 电位比FcBA在溶液中的式量电位(0．124V)正移了175mV，说明FcBA与糖化血红蛋白分子的相互作 用改变了电极表面的微环境，FcBA与大分子的结合使FcBA的电化学氧化一还原发生在更高的电位¨…。 基金项目：江苏省自然科学基金资助项目(BK2006090) 一33— 第25卷 分析测试学报 增刊 度)增加而增加，因此增加电极表面HbAlc的浓度导致电极表面FcBA量的增加并产生大的伏安响应，这可 (血红蛋白总量15×10—1 的测定，20个样品的测定结果与HPLC方法所得结果进行对比其偏差为一10．7％～31％。 3 2 ●