糖化蛋白质分子与苯硼酸自组装单层的特定相互作用论文.pdfVIP

第九届全国电分柝化学学术会议论文摘要集 C电化学生物传感器与生物分析化兰 一。 。 ___——_-__——-__-—·-·—___。_■-——_—____————__--_’’。。o‘——…。——。’‘。。o’。…‘—————————————————————一 C36糖化蛋白质分子与苯硼酸自组装单层的特定相互作用 刘松琴 孙岳明 (东南大学化学工程系，南京210096) 最近利用硼酸．糖之间的特定相互作用制备糖或糖化蛋白质传感器的研究引起人们越来 越广泛的兴趣【l】。硼酸在水溶液中在较温和以及较易控制的条件下能与1，2-或1，3．邻羟基反 应形成五元或六元环化合物【21， 当硼酸被固定在凝胶基质上能被用作硼亲和色谱用来分离， 提纯和测定糖化蛋白质，尤其是分离与测定糖化血红蛋白【31。利用自组装技术将硼酸分子固定 在固体电极上，固定化硼酸分子对糖分予具特定的识别作用，可用来制备单糖传感器【4】。Gorton 课题组【5】最近利用环氧基．硼酸杂合功能单层来识别溶液中的糖化蛋白质分子，并用原子力显 微镜，石英电子微天平以及电极对过氧化氢还原的催化作用研究蛋白质分子与固定化硼酸的 相互作用。本文在前人工作的基础上，设计了一个简单的过程来研究糖化蛋白质与氨基苯硼 酸自组装单层的可逆特定相互作用。 氨基苯硼酸自组装单层由3，3’·dithiodipropionic acid(APBA)的化合物组装在金电极表面形成。由硫醇在 acid(MUA)与3-aminophenylboronic 碱性溶液中的还原脱附峰求得该自组装单层的表面覆盖度分别为5．7×10。omol／cm2和 1．6×10’9 mol／cm2。为研究该自组装单层与糖化蛋白质分子的相互作用，我们选择了FAD．HRP 以及HbA lc作为模型分子。当APBA．DTSP uJ mM 修饰金电极在l FAD溶液中浸泡3小 M PBS 时，二次水冲洗干净后置于0．1 pH6．5 nn 中并在200 mV／s循环扫描，其循环伏安图出 现一对准可逆的氧化还原波，而同样条件下 《‘0．3 在裸金电极以及APBA．DTSP．Au电极上未发 意．。 现任何峰，说明该氧化还原波是由于FAD在 a 电极上的反应，同时也说明FAD能与氨基苯 -0．9 硼酸自组装单层反应并通过此反应使FAD分 ．． 242 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 C电化学生物传感器与生物分析化学 将所得APBA自组装单层修饰电极在HRP溶液中浸泡2小时，冲洗干净后测量其电化 学响应，在研究的电位窗IZl未发现任何HRP的直接电化学信号，但在电子传递媒介体存在时 观察到该电极对过氧化氢还原的催化波，说明HRP分子已经被阑定在电极表面。为证明HRP 的固定是由于HRP分子中的糖化活性点与硼酸分子之间的特定相互作用，我们将HRP／APBA 修饰电极在酸性缓冲溶液(4．5)，果糖以及sorbitol溶液中浸泡30分钟，其催化电流分别降 低了58％．57％and69％，催化电流的降低说明HRP从电极上离去。将这些电极在HRP溶液 中重新浸泡2小时，其催化电流分别恢复了70％，14％and86％。这些结果说明HRP与APBA 之间的相互作用包含特定的与非特定作用两部分，其特定作用部分是可逆的，可在酸性缓冲 溶液中离去或用糖小分子剥离。石英电子微天平以及光活性试验结果支持了上述结论。 为研究APBA自组装单层与糖化 血红蛋白分子之间的相互作用，将 8：… n APBA修饰金电极在Hb溶液中浸泡2